Результаты и их интерпретация

Предыдущая 1 2 3 4 5 6 7 8 91011 12 Следующая

Положительный результат - наличие роста в контроле и на среде с салициловокислым натрием.

Отрицательный результат - рост только в контроле.

7.2.2.3. Тест с 5% хлоридом натрия

Принцип метода.Метод основан на способности ряда видов нетуберкулезных микобактерий расти на среде, содержащей 5% хлорида натрия. Большинство быстрорастущих и некоторые медленнорастущие микобактерии (M.triviale) могут расти на средах, содержащих NaCl. Некоторые штаммы M. flavescens могут расти в в присутствии 5% NaCl. А неспособность M. chelonae subsp. chelonae расти с хлоридом натрия помогает выделить его от других членов M. fortuitum комплекса. Микобактерии комплекса M. tuberculosis на этой среде не растут.

Приготовление среды с 5% хлоридом натрия

Яичную среду Левенштейна-Йенсена готовят по стандартной методике. К 300 мл готовой яичной среды добавляют 15г NaCl, хорошо перемешивают. Среда, не содержащая NaCl, используют в качестве контроля роста. Обе среды разливают по пробиркам и помещают в свертыватель на 50 минут при 85°С.

Методика

Производят посев в две пробирки со средой Левенштейна-Йенсена, одна из которых содержит 5% NaCI, другая – контрольная без хлорида натрия. В процессе инкубации при 37°С пробирки исследуют на 3-й, 7-й, 14-й и 21-й день.

Результаты и их интерпретация

Если на 4 неделе в пробирках со средой с NaCI выросло более 50 колоний, то результат считается положительным. В контроле за этот период должен появиться обильный рост.

Положительный результат - наличие роста в контроле и на среде с NaCI.

Отрицательный результат - рост только в контроле.

Тест с гидразидом тиофен-2-карбоксиловой кислоты (TCH)

Принцип метода. Этот тест позволяет отдифференциировать M. bovis от M. tuberculosis и других нехромогенных медленнорастущих микобактерий. Только M. bovis чувствителен к низким концентрациям TCH (1-5 мкг/мл). Устойчивые к изониазиду штаммы M. bovis могут быть устойчивы к TCH. M. tuberculosis и другие микобактерии резистентны к ингибирующему действию этого соединения.

Приготовление среды с TCH

Готовят два объема среды Левенштейна-Йенсена. Одну часть используют как контроль среды без препаратов; в другую добавляют стерильный профильтрованный TCH так, чтобы конечная концентрация в среде была 2 мкг/мл. Разливают среду в стерильные пробирки.

Контроли

В качестве контроля используются пробирки с питательной средой без TCH

Методика

7-дневную исследуемую культуру разводят до 10^-3 и 10^-5 (1:1000 и 1:100 000) стерильным физраствором или дистиллированной водой, засевают по 0,1 мл каждого разведения на контрольную среду и среду, содержащую TCH. Инкубируют в течение 3 недель при 37°C с 10% атмосферным СО₂, затем учитывают результат.

Результаты и их интерпретация

Микобактерия считается резистентной к TCH, если регистрируется такой же (или на 1% больше) рост на среде с препаратом, как в контроле.

Дифференциация микобактерий комплекса M. tuberculosis

Для дифференциации микобактерий комплекса M. tuberculosis, к которому относятся следующие виды микобактерий: M. tuberculosis, M. bovis., M. africanum, M. microti – обязательными являются следующие тесты:

– ниациновый тест;

– нитратредуктазный тест;

– термостабильность каталазы;

– наличие роста на среде с натрием салициловокислым (1 мг/мл) или на среде, содержащей паранитробензойную кислоту (500 мкг/мл);

– рост на среде, содержащей 5% хлорида натрия.

Таблица1

Тесты для дифференциации микобактерий комплекса M. tuberculosis

Дифференциальные тесты	Микобактерии
M. tuberculosis	Нетуберкулезные медленнорастущие
Ниациновый тест	+	–*
Нитратредуктазная активность	+	±
Термостабильность каталазы	–	+
Рост на среде с натрием салициловокислым (1000 мкг/мл)	–	+/±
Рост на среде с паранитробензойной кислотой (500 мкг/мл)	–	+**
Рост на среде с 5% хлоридом натрия	–	+***

* За исключением M. simae;

** За исключением M. gastri;

*** За исключением M. marinum, M. terrae

Для дифференциации M. tuberculosis и M. bovis следует учитывать результаты следующих проб:

– ниациновый тест;

– нитратредуктазный тест;

– пиразинамидазный тест;

– рост на среде, содержащей 2 мкг/мл гидразида тиофен-2 карбоксиловой кислоты (TCH).

7.4. Дифференциация M. tuberculosis и M. bovis

Таблица 2

Тесты для дифференциации M. tuberculosis и M. bovis

Дифференциальные тесты	Виды микобактерий комплекса M. tuberculosis
M. tuberculosis	M. bovis
Ниациновый тест	+	–
Нитратредуктазный тест	+	–
Пиразинамидаза	+	–
ТСН (2 мкг/мл)	+	–

7.5. Идентификация атипичных микобактерий

Тесты дифференциации атипичных микобактерий приведены в табл. 3.

Таблица 3

Тесты для дифференциации микобактерий

Тесты

Микобактерии

Туберку-лезные

Атипичные

M.tuberculosis

M.bovis

Фотохромо-генные

Скотохромо-генные

Нефотохромогенные

Быстрорастущие

M. kansasii

M. asiaticum

M.marinum

M.scrofulaceum

M.gordonae

M. szulgai

M. avium

M. malmoense

M. intracellulare

M. xenopi

M. triviale

M. terrae

M. haemophilum

M. fortuitum

M. chelonae

M. abscessus

M. phlei

M. smegmatis

Скорость роста

Образование пигмента в темноте

+/-

-/+

Образование пигмента на свету

+/-

Ниациновый тест

Нитратредуктазный тест

Каталазная активность (полуколичественный метод) >45мм

Термостабильность каталазы 68°С

-/+

Рост на среде с паранитробензойной кислотой

+/-

Рост на среде с салициловокислым натрием

+/-

Рост на среде с 5% NaCl

Гидролиз твина

+/-

-/+

+/-

-/+

Уреаза

-/+

Пиразинамидаза

-/+

+/-

Тест с гидразидом тиофен-2-карбоксиловой кислоты (TCH)

Рост на яичной среде при 37°С

Рост на яичной среде при 22°С

+/-

Рост на яичной среде при 45°С

-/+

Обозначения:

– Для скорости роста: м – медленный рост; б – быстрый рост.

– Для роста на средах: + рост всех культур; - рост отсутствует; +/- не все культуры дают рост; -/+ большинство культур не дают роста.

–Для образования пигмента: + образуется пигмент; - не образуется пигмент; +/- большинство культур образуют пигмент; -/+ отдельные культуры образуют пигмент

– Для биохимических реакций: + положительная; - отрицательная; +/- не все культуры дают положительную реакцию; -/+ не все культуры дают отрицательную реакцию.

Учреждение

Тел.

НАПРАВЛЕНИЕ

На бактериологическое исследование

1. ФИО больного ____________________________

___________________________________________

2.Год рождения______________________________

3.Адрес_____________________________________

4.Диагноз___________________________________

___________________________________________

5.Сведения о полученном больным лечении (получал лечение менее 1 мес., более 1 мес., хроник)

6. Направляемый материал____________________

7. Цель исследования_________________________

8. Дата взятия материала______________________

9. Фамилия лечащего врача___________________

Подпись взявшего материал

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

линия отреза

Отрывной талон

Бактериоскопии

ФИО больного_______________________________

Отделение или леч. учреждение и адрес больного____________________________________

Наименование материала______________________

Дата взятия материала________________________

АНАЛИЗ № ______

1.Бактериоскопия материала

не обнаружены

КУБ

обнаружены (…, +, 2+, 3+)

2. Бактериологическое исследование

не выделена

Культура МБ

выделена (рост обильный, умеренный, ед. колонии)

3. ___________________________________________

«___» ______________________ 200 г.

Врач-бактериолог _____________________________

- - -- - - - - -- - - - -- - - - - - - - - -- - -- - - - - - - - - - -

АНАЛИЗ № ______

Бактериоскопия материала

не обнаружены

КУБ

обнаружены (…, 1+, 2+, 3+)

«___» ______________________ 200 г.

Врач-бактериолог ____________________________

Приложение 2

Предыдущая 1 2 3 4 5 6 7 8 91011 12 Следующая

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: