Лабораторная работа. Биохимическая диагностика сахарного диабета

В полученной задаче определить глюкозу в крови и построить сахарную кривую.

На основании полученных результатов сделать вывод о наличии или отсутствии сахарного диабета.

Определение глюкозы крови глюкозооксидазным методом.

Принцип метода. Глюкозооксидаза окисляет глюкозу с образованием перекиси водорода, которая под действием пероксидазы окисляет хромоген хлоркрезол с образованием окрашенного продукта. Обе реакции протекают одновременно.

Ход работы. Внести в пробирки образцы сыворотки крови и реагенты по схеме:

Пробы тщательно перемешать и инкубировать 15 мин при 37^ОС, затем интенсивно встряхнуть. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 490 нм в кювете толщиной 3 мм против контроля. Расчет концентрации глюкозы проводят по формуле:

С = (Е_О/Е_С) х 10;

где: С – концентрация глюкозы в ммоль/л.

Е_О – оптическая плотность опытной пробы.

Е_С – оптическая плотность стандартной пробы.

10 – концентрация глюкозы в стандартной пробе, ммоль/л.

Норма глюкозы крови утром натощак – 3,3-5,5 ммоль/л.

Определение глюкозы в моче

В лунки иммунологического планшета вносят 0,05 мл мочи и 0,2 мл рабочего реактива.

Отсутствие развития окраски в течение 2 мин свидетельствует об отсутствии глюкозы в данной пробе. Пробы мочи, вызывающие покраснение реакционной смеси, считают положительными.

Определение глюкозы в моче с использованием глюкотеста

Глюкотест, предназначен для качественного экспресс-анализа глюкозы в моче.

Тест полоску погружают в мочу на 1-2 секунды и вынимают, оставшуюся на полоске мочу удаляют о край сосуда и выдерживают на воздухе от 1 до 3 минут. Визуально определяют цвет. Переход светло-бежевого в синий, светло-розового в красный, желтого в зеленый учитывают как положительный результат. Положительные пробы мочи направляются на количественное исследование.

Чувствительность составляет 1,4 – 5,6 ммоль/л или не более 0,1% массовой доли глюкозы в исследуемой моче.

Диагностическое значение определения глюкозы в крови и моче

Для диагностики целого ряда заболеваний (к числу которых прежде всего следует отнести сахарный диабет, патологические состояния, связанные с недостаточностью функции печени и почек, некоторые эндокринные заболевания, новообразования мозга, поджелудочной железы и надпочечников, гиповитаминоз В₁, а также ряд наследственных аферментозов) важно иметь объективное представление о состоянии углеводного обмена, главным показателем которого служит содержание глюкозы в крови.

Гипергликемия – это увеличение содержания глюкозы в крови выше нормы (6,7 – 7,0 ммоль/л) наблюдается обычно при следующих состояниях:

1) сахарном диабете, остром панкреатите, панкреатических циррозах (эти заболевания дают гипергликемию, связанную с недостаточностью инсулина);

2) токсическом, травматическом, механическом раздражении центральной нервной системы. Травмы, опухоли мозга, а также эпилепсия, менингит, отравления ртутью, окисью углерода, синильной кислотой, эфиром дают так называемую центральную (нервную) гипергликемию;

3) при гипефункции щитовидной железы, коры и мозгового вещества надпочечников, гипофиза (в этом случае выделяется больше гипергликемических гормонов);

4) при сильных эмоциях и психическом возбуждении;

5) после обильного приема с пищей углеводов – алиментарная гипергликемия.

Гипогликемия – это снижение содержания глюкозы в крови встречается при:

1) передозировке инсулина (при лечении сахарного диабета);

2) заболеваниях почек, когда нарушается процесс реабсорбции в канальцах;

3) плохом всасывании углеводов вследствие заболевания тонкого кишечника;

4) недостаточной выработке гипергликемических гормонов;

5) при гиперфункции островков Лангерганса поджелудочной железы (аденомы, гиперплазии, гипертрофии);

6) при острых и хронических гепатитах, циррозах, дистрофии печени, механической желтухе, алкогольной интоксикации, при раке печени, отравлении фосфором, бензолом, хлороформом, мышьяком;

7) после больших потерь крови;

9) при спленомегалии (у детей);

10) при несбалансированной диете (неправильном соотношении пищевых веществ), от недоедания и голода – алиментарная гипогликемия.

Глюкозурия – повышение глюкозы в моче. Глюкозурия наблюдается при сахарном диабете, синдроме Иценко-Кушинга, акромегалии, феохромацитоме, тиреотоксикозе, инсульте, энцефалите, травмах и опухолях головного мозга, гепатитах, циррозе, инфаркте миокарда, воспалении легких. Глюкозурия наблюдается также при заболеваниях почек, связанных с нарушением реабсорбции глюкозы в почечных канальцах, пиелонефрите, гломерулонефрите, нефросклерозе, почечном диабете, раке почек. Во всех перечисленных случаях концентрация глюкозы превышает верхнее значение почечного порога 9,99 ммоль/л.

В моче здорового человека глюкоза практически не обнаруживается. Но может обнаружиться при некоторых физиологических состояниях (физиологическая глюкозурия): алиментарная глюкозурия, после психоэмоционального напряжения, при приеме лекарств (кофеина и других).

Защита лабораторной работы

А) Вопросы для защиты лабораторной работы

1. Принцип метода колориметрии.

2. Принцип метода центрифугирования.

3. Что такое стандартный раствор?

4. Чем различаются контрольная и опытная пробы?

5. Как строится сахарная кривая? Что она дает для диагностики?

6. Что такое сахарная нагрузка?

7. Какой вид имеют сахарные кривые в норме и патологии?

8. Почему у больных сахарным диабетом периодически измеряют содержание холестерина в сыворотке крови?

9. Почему у больных сахарным диабетом периодически измеряют содержание серогликоидов в сыворотке крови?

10. Почему у больных сахарным диабетом периодически измеряют содержание кетоновых тел в моче?

11. Чем опасна длительная гипергликемия?

12. Почему у больных сахарным диабетом повышается содержание мочевины в сыворотке крови?

13. Почему повышение кетоновых тел в крови опасно для жизни?

14. Почему у больных сахарным диабетом часто возникает катаракта?

15. Почему у больных сахарным диабетом рН крови сдвигается в кислую сторону?

Б) Ситуационные задачи

1. Почему Но-шпа снимает мышечный спазм?

2. Какие преимущества создает синтез гормонов в виде прогормонов и препрогормонов?

3. Напишите схему регуляции выработки периферических гормонов через гипоталамус-гипофиз, используя ее, ответьте на следующие вопросы:

а) что такое прямая связь? Какое значение она имеет в регуляции?

б) что такое обратная связь? Виды обратных связей. Какое значение в регуляции они имеют?

в) к чему приведет поломка отрицательной обратной связи?

г) назовите причины усиления выработки периферических гормонов.

4. Почему для регуляции требуются небольшие концентрации регуляторов? Приведите примеры.

5. В чем биологический смысл того, что межклеточные регуляторы действуют не прямо, а включают механизмы внутриклеточной регуляции?

6. Почему снижение выработки соматостатина приводит к акромегалии?

7. Одним из осложнений акромегалии является сахарный диабет. Почему он возникает?

8. Ребенок отставал в росте от своих сверстников. Какие биохимические исследования необходимо провести, чтобы выяснить причины этого состояния?

9. Объясните, почему усиление секреции глюкагона может привести к истощению запасов инсулина?

10. Почему усиление секреции тиреолиберина может вызвать лактацию у женщины?

11. Дофамин ингибирует секрецию пролактина. К чему может привести недостаток дофамина?

12. В клинику поступил больной с запахом ацетона изо рта? Ваша тактика?

13. Два больных диабетом в бессознательном состоянии доставлены в клинику. После инъекции глюкозы один их них пришел в сознание, другой остался без сознания. Каковы причины этих состояний?

14. Почему инсулин назначают больным сахарным диабетом в виде инъекций, а не в виде таблеток?

15. На приеме у врача больные сахарным диабетом. Один пациент пожилого возраста страдает ожирением, у другого – молодого вес тела существенно ниже нормы. Объясните, чем отличается направленность липидного обмена у этих больных?

16. У пациента в крови и моче резко повышено содержание ацетоацетата и β-гид-роксибутирата. Что может быть причиной этого повышения? Какие дополнительные биохимические исследования необходимо назначить для уточнения диагноза?

17. У пациента опухоль поджелудочной железы. При этом повышен синтез инсулина и наблюдаются симптомы: дрожь, слабость и утомляемость, потливость, постоянное чувство голода. Как влияет избыток инсулина на обмен веществ? Почему развиваются выше названные симптомы? Почему это может привести к нарушению мозговой деятельности?

18. Больному сахарным диабетом назначены инъекции инсулина, но положительного эффекта не было, и концентрация глюкозы в крови оставалась высокой. Какой тип сахарного диабета можно предположить у больного? Ответ обоснуйте.

19. Существует выражение: «сахарный диабет – это голод среди изобилия». Объяните это выражение.

20. Почему гипертиреоз, как правило, не сопровождается такими заболеваниями как атеросклероз и гипертония?

21. Исходя из знаний гормональной регуляции тонуса гладких мышц сосудов перечислите вещества-регуляторы или их синтетические аналоги, которые можно использовать: а) для лечения гипертонической болезни; б) при шоковых состояниях.

22. Почему при приступах бронхиальной астмы нельзя часто использовать препараты, стимулирующие β-адренорецепторы? Что необходимо назначить, если прием этих средств не предупреждает развития астматического статуса?

23. Одним из перспективных путей разработки лекарственных препаратов для лечения атеросклероза признается синтез аналогов тиреоидных гормонов. Почему? Что мешает использовать для этих целей тироксин или трийодтиронин?

24. При обследовании ребенка 5 лет отмечено значительное отставание умственного развития и роста. Ребенок мало активен. В крови повышено содержание холестерина. Основной обмен снижен. С нарушением каких гормонов можно связать выше названные изменения?

25. Изменится ли интенсивность синтеза АКТГ и кортикостероидов у больного, которому с лечебной целью вводят глюкокортикостероиды?

26. Человек неадекватен в своем поведении, агрессивен, часто конфликтует в быту и на работе. Избыток какого гормона может способствовать формированию такого поведенческого статуса?

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: