Опыт 1. Амфотерные свойства глицина.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

Реактивы. 1. Глицин, 1%-ный раствор.

2. Метиловый красный, раствор.

3. Формальдегид, 10%-ный раствор.

1. В пробирку налейте 0,5 мл раствора глицина.

2. Добавьте 1 каплю метилового красного.

3. Затем в пробирку добавьте 2 капли раствора формальдегида.

Почему изменился цвет индикатора? Почему аминокислоты проявляют амфотерные свойства?

Опыт 2. Обнаружение ароматических и гетероциклических аминокислот (ксантопротеиновая реакция).

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Водяная баня, кипящая.

4. Газовая горелка.

Реактивы. 1. Тирозин, 1%-ный раствор.

2. Желатин, 1%-ный раствор.

3. Яичный белок, 1%-ный раствор.

4. Азотная кислота, концентрированная.

5. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

1. Возьмите три пробирки.

2. В первую пробирку налейте 0,5 мл 1%-ного раствора тирозина, во 2-ю 0,5 мл 1%-ного раствора желатина, в 3-ю - 0,5 мл 1%-ного раствора яичного белка.

3. В каждую пробирку добавьте по 3 капли концентрированной азотной кислоты и осторожно (!) кипятите в кипящей водяной бане.

4. После охлаждения пробирок до комнатной температуры в каждую из них добавьте по 0,5 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия.

Объясните результаты опыта. Какой структурный фрагмент молекулы a-аминокислоты выявляется с помощью ксантопротеиновой реакции?

Опыт 3. Обнаружение аминокислот, содержащих слабосвязанную серу (реакция Фоля).

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Газовая горелка.

4. Держатель для пробирок.

Реактивы. 1. Яичный белок, 1%-ный раствор.

2. Желатин, 1%-ный раствор.

3. Гидроксид натрия, 30%-ный раствор.

4. Ацетат свинца, 5%-ный раствор.

1. Возьмите две пробирки.

2. В первую пробирку налейте 1 мл 1%-ного раствора яичного белка, во вторую 1 мл раствора желатина.

3. Добавьте в каждую пробирку по 0,5 мл 30%-ной щелочи и 3-4 капли 5%-ного раствора ацетата свинца.

4. Нагрейте пробирки до кипения в водяной бане.

Объясните причину постепенного потемнения раствора в одной из пробирок.

Опыт 4. Обнаружение триптофана (реакция Адамкевича).

При действии на белок глиоксиловой кислоты в присутствии концентрированной серной кислоты получается красно-фиолетовое окрашивание раствора, связанное с присутствием в белке триптофана.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

Реактивы. 1. Раствор белка.

2. Уксуная кислота, концентрированная.

3. Серная кислота, концентрированная.

1. Налейте в пробирку несколько капель раствора белка и прибавьте 1 мл концентрированной уксусной кислоты, которая всегда содержит в качестве примеси глиоксиловую кислоту.

2. Сильно наклоните пробирку и осторожно по стенке влейте в нее 1 мл концентрированной серной кислоты так, чтобы жидкости не смешались.

3. На границе двух жидкостей получается красно-фиолетовое кольцо, появление которого свидетельствует о присутствии в белке триптофана.

4. Запишите Ваши результаты. Напишите формулу триптофана.

Опыт 5. Обнаружение пептидной группы (биуретовая реакция).

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

Реактивы. 1. Глицин, 1%-ный раствор.

2. Яичный белок, 1%-ный раствор.

3. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

4. Сульфат меди, 2%-ный раствор.

1. Возьмите две пробирки.

2. В 1-ю пробирку налейте 0,5 мл 1%-ного раствора глицина, во 2-ю – 0,5 мл 1%-ного раствора яичного белка.

3. В каждую пробирку добавьте 10 капель 10%-ного раствора гидроксида натрия, а затем по 2-3 капли 2%-ного раствора сульфата меди (II).

В какой из пробирок появляется сине-фиолетовое окрашивание и почему? Напишите реакцию образования пептидной связи между двумя аминокислотами.

Опыт 6. Реакции осаждения белков.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Стеклянная палочка.

4. Водяная баня, кипящая.

Реактивы. 1. Яичный белок, 1%-ный раствор.

2. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

3. Ацетон.

4. Сульфат аммония, насыщенный раствор.

5. Дистиллированная вода.

6. Уксусная кислота, 1%-ный раствор.

7. Уксусная кислота, 10%-ный раствор.

8. Трихлоруксусная кислота, 10%-ный раствор.

9. Ацетат свинца, 5%-ный раствор.

А) Обратимое осаждение белков сернокислым аммонием (высаливание).

1. В пробирку налейте 0,5 мл раствора яичного белка.

2. Добавьте равный объем насыщенного раствора сернокислого аммония.

Объясните причину выпадения осадка.

3. К раствору с осадком белков добавьте равный объем дистиллированной воды, хорошо перемешайте.

Почему наблюдается постепенное исчезновение осадка белков?

Б) Осаждение белков при кипячении.

1. Возьмите четыре пробирки.

2. В каждую налейте по 0,5 мл раствора белка.

3. Первую пробирку оставьте без изменений, во 2-ю добавьте 1 каплю 1%-ной уксусной кислоты, в 3-ю – 5 капель 10%-ной уксусной кислоты, в 4-ю – 5 капель 10% гидроксида натрия.

4. Содержимое всех пробирок поставьте на 5 мин в кипящую водяную баню.

5. Сравните характер изменения растворов при нагревании.

Запишите в таблицу результаты осаждения белков при кипячении в различных средах (отметьте положительный результат осаждения плюсом, а отрицательный - минусом) и укажите в каждом случае причины появления или отсутствия осадка белка.

В) Осаждение белков солями тяжелых металлов, концентрированными минеральными кислотами, органическими растворителями.

1. Возьмите три пробирки.

2. В каждую налейте по 0,5 мл раствора белка.

3. В первую пробирку добавьте 2 капли 5%-ного раствора уксуснокислого свинца, во 2-ю – 2 капли концентрированного раствора азотной кислоты, в 3-ю – 0,5 мл ацетона.

Результаты реакций осаждения белков запишите в таблицу:

Дата выполнения _______Балл _______Подпись преподавателя ____________

Занятие № 6. «Ферменты»

Цель занятия:Сформировать знания о природе, свойствах и механизмах действия ферментов.

Вопросы к контрольной работе:

1. Ферменты: классификация и номенклатура.

2. Строение ферментов: апофермент, кофермент, каталитический центр, аллостерический центр и их биохимическое значение.

3. Отличие ферментов от неорганических катализаторов: термолабильность, влияние рН на активность, специфичность. Особенности ферментного катализа. Чем объяснить, что в качестве биологических катализаторов природой избраны именно белки?

4. Какие вещества относят к числу коферментов? Классификация коферментов. Механизм действия коферментов. Чем отличается кофермент от простетической группы?

5. Активность ферментов. Активаторы и ингибиторы ферментов. Механизм их действия. Типы ингибирования ферментов.

6. Способы регулирования скоростей ферментативных реакций и направленности биохимических процессов. Понятие о проферментах, изоферментах, мультиферментных комплексах и их роли в метаболизме.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Термолабильность ферментов.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Водяная баня.

4. Химический стаканчик, 50 мл.

5. Газовая горелка.

6. Держатель для пробирок.

7. Маркер для пробирок.

Реактивы. 1. Дистиллированная вода.

2. Крахмал, 1%-ный раствор.

3. Реактив Люголя.

4. Раствор амилазы.

1. Пронумеруйте три пробирки и налейте в них по 1 мл раствора слюны (амилаза).

2. Для получения раствора слюны предварительно ополосните рот дистиллированной водой. Затем наберите в рот приблизительно 20-25 мл дистиллированной воды. В течение 10-15 сек. тщательно полощите рот. Полученный раствор амилазы соберите в стаканчик и используйте для дальнейших опытов.

3. Слюну в пробирке №1 прокипятите в течение 2-х минут в кипящей водяной бане.

4. Затем во все пробирки добавьте по 1 мл 1%-ного раствора крахмала.

5. Пробирки №1 и 2 поставьте в водяную баню (37°С) на 10 минут.

6. Пробирку №3 погрузите на 10 минут в лед.

7. По истечении указанного времени во все пробирки добавьте по 1 капле реактива Люголя или раствора йода. Результаты опыта занесите в таблицу:

Объясните результаты эксперимента.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: