Лабораторная идентификация вирусов и диагностика заболеваний

Калицивирусы обнаруживаются в фекалиях и рвотных массах больных острой инфекцией. Они экскретируются обычно в низкой концентрации.

1. Электронная и иммуноэлектронная микроскопия. Этот метод применялся на начальных этапах исследования калицивирусов, но он остается полезным и в настоящее время. Его чувствительность достаточно лимитирована — 10⁶ вирусных частиц на 1 г фекалий.

2. ИФА антигенов вируса в материале. Имеется два варианта ИФА антигенов калицивирусов в материале — выявление капсидного антигена вируса с помощью гипериммунной сыворотки к экспрессированному в бакуловирусной системе капсидному антигену вирусов и с помощью ИФА с моноклональными антителами.

3. Молекулярно-биологическая диагностика. Широко используется в клинических и эпидемиологических исследованиях ОТ-ПЦР. В настоящее время это наиболее чувствительный метод. Используются праймеры к консервативным областям генома вирусов (область, кодирующая РНК-полимеразу). Позволяет выявить вирусы в материале от больных, объектах окружающей среды (контаминированные вода, пищевые продукты и др.).

4. Серологическая диагностика. Для серологической диагностики используются иммуноферментные диагностические системы, выявляющие в сыворотке крови вирусспецифические антитела к капсидному белку вирусов. Имеются возможности выявления как IgM, так и IgG антител.

5. Культивирование вирусов в культуре клеток не применяется.

Пути передачи. Вирусы способны передаваться различными путями — контактным от больного индивидуума здоровому, водным и пищевым путями при употреблении контаминированной вирусами воды и пищевых продуктов. Вирусы способны длительно выживать в воде и пищевых продуктах.

Эпидемиология. Риск инфицирования калицивирусами имеется у лиц всех возрастных групп. Частота выявления антител в сыворотке крови к этим вирусам резко возрастает уже в первые 2-3 года жизни. Следующий подъем в выявлении антител — школьный возраст, а также юношеские годы. Среднегеометрические титры антител в развивающихся странах наиболее высоки у лиц старших возрастных групп. Заболеваемость часто регистрируется в виде крупных вспышек (пищевых, водных), больше вызывающих заболевания у взрослых, а Саппоро-подобные вирусы — у детей.

Патогенез заболеваний.Инкубационный период заболеваний, вызываемых калицивирусами, составляет 24-48 часов (может колебаться от 4-х до 72 часов). Максимальная экскреция вируса отмечается очень короткий период времени. Наибольшая длительность выделения вируса — 2 недели с момента развития болезни. Вирус определяется в фекалиях. Наибольшие изменения отмечаются в дистальном отделе тонкого кишечника и проявляются некротическими поражениями слизистой. Заболевание проявляется диареей. Оно может протекать с рвотой (чаще у детей), диареей (у подростков и взрослых). Заболевание ассоциируется с миалгией, головной болью, лихорадкой (около 50% случаев). Через 7-10 дней наступает выздоровление. Локальное воспаление тонкого кишечника сохраняется еще в течение 4-х дней после исчезновения клинических симптомов болезни.

Лечение и профилактика. Лечение симптоматическое. Профилактика аналогична таковой при астровирусных гастроэнтеритах.

Кишечные аденовирусы

Характеристика. Кишечные аденовирусы относятся к семейству Adenoviridae, род Mastadenovirus. Это простой ДНК геномный (двуцепочечная, линейная) вирус, 33-45 кб объемом информации. Вирион — 70-90 нм в диаметре. Капсид имеет икосаэдрическую симметрию и антенноподобные выступы (фибры) на каждом из 12 углов. Наиболее важными серотипами в патогенезе гастроэнтеритов являются 40 и 41.

Репликация. Репликация вирусов осуществляется в ядре клеток. После вхождения в ядро геном вируса транскрибируется клеточной РНК полимеразой II с образованием ранних полимераз, а затем поздних.

Лабораторная идентификация и диагностика заболеваний

1. Электронная и иммуноэлектронная микроскопия.

2. ИФА для выявления антигена вирусов в материале.

3. ИФА для выявления вирусспецифических антител в сыворотке крови больных.

4. ПЦР диагностика.

5. Вирусологический метод — выделение вируса на культуре клеток
СоСо-2.

Пути передачи. Основной механизм передачи — фекально-оральный.

Эпидемиология. От 2 до 22% случаев диарейных инфекций у детей ассоциируются с кишечными аденовирусами. Отмечаются вспышки инфекции в госпиталях, детских садах. Наиболее часто болеют дети. Частота выявления антител в сыворотке крови детей увеличивается на первом году жизни, а к 3-4 году они выявляются примерно у 50% детей.

Патогенез заболевания. Инкубационный период заболевания — 3-10 дней. Характеризуется более длительным течением в сравнении с ротавирусной инфекцией, меньшей лихорадкой и дегидратацией. Диарея продолжается от 6 до 9 дней и может варьировать от 4 до 23 дней, может сопровождаться рвотой и лихорадкой. Лечение и профилактика — аналогичны другим вирусным гастроэнтеритам.

Ротавирусы

Характеристика. Ротавирусы — наиболее распространенные патогены человека, животных и птиц. Ротавирусы человека впервые выявлены методом ЭМ в 1973 г. (Бишоп). Ротавирусы человека являются наиболее частой причиной тяжелых гастроэнтеритов во всем мире. Они относятся к семейству Reoviridae, роду Rotavirus. Геном вируса — двуцепочечная РНК, сегментированная (11 сегментов), объемом информации 18,5 kb. Это простой вирус, диаметр вириона — 75 нм. Каждый сегмент генома кодирует не менее одного вирусного белка. Имеется 8 капсидных белков. Нуклеокапсид имеет два слоя: внутренний икосаэдрический и наружный. Инфекционностью обладают двуслойные вирионы. Имеет форму колеса (от лат. rota). Репликация вирусов и общая структура вириона за некоторыми исключениями подобны таковой реовирусов. Ротавирусы подразделяются на 6 групп (А–F) на основании серологических различий. Вирусы первых трех групп (А-С) выявлены у человека. Вирусы группы В вызывают эпидемии холероподобных диарей в Китае и спорадические инфекции повсеместно. Вирусы группы С вызывают вспышки инфекции и спорадические заболевания диареей. Вирусы группы А наиболее распространены. Они подразделяются на два антигенных типа на основании антигенных различий главного группового антигена VP6 (подгруппа 1 и 2).

Репликация.После прикрепления к рецепторам ротавирусы проникают в эндосомы. В эндосомах или лизосомах происходит депротеинизация вириона (утрата двух поверхностных белков — δ3, μ1С) и образуются инфекционные субвирусные частицы (ИСЧ).Процесс блокируется агентами, предотвращающими закисление эндосом. Это указывает на важность процесса протеолиза в эндосомах в репликации вируса. ИСЧ можно получить in vitro путем обработки протеазами. ИСЧ проходит через мембрану эндосом и оказывается в цитоплазме. В цитоплазме из ИСЧ образуются коровские транскрипционно активные частицы. Каждый из 10 сегментов двухцепочечной РНК используется для синтеза соответствующих мРНК. Они имеют кэп, но не полиаденилированы. Синтез мРНК является консервативным процессом. Все необходимые для синтеза РНК ферменты локализуются в сердцевине вируса. Вновь синтезированные молекулы мРНК и двухцепочечные РНК выталкиваются из сердцевины. Это активный процесс. На основе десяти мРНК транслируется 12 белков (8 структурных и 4 неструктурных). Сборка вирионов происходит в цитоплазме.

Лабораторная идентификация и диагностика заболеваний. Материалом для исследования являются фекалии и рвотные массы. Для серологических исследований — сыворотка крови. Индикация и идентификация ротавирусов осуществляется следующими методами:

1. Вирусологическая диагностика. Выделение вируса на культуре клеток представляет существенные трудности. Для этих целей применяются многие типы клеток — MDBK, PK-15, BSC-1, CoCo-2, HRT-29 и др.

2. Методы ЭМ и ИЭМ использовались в раннем периоде изучения инфекции.

3. ИФА для выявления ротавирусного антигена в биологических пробах.

4. Молекулярно-биологическая диагностика. Используется метод ОТ-ПЦР и метод гибридизации для типо- и родоспецифичных фрагментов генома. Это более чувствительные методы в сравнении с ИФА.

5. Серологическая диагностика основана на выявлении в сыворотке крови вируспецифических (к специфическим серотипам вируса) антител. Выявляют группоспецифические IgM, IgG и IgA антитела.

Пути передачи. Основной путь передачи — фекально-оральный и от больного здоровому. Отмечается осенне-зимняя сезонность. Инфицирующая доза относительно низкая — 10². Экскреция вируса достигает 10¹¹ вирусных частиц в 1 г испражнений.

Эпидемиология.Ротавирусные инфекции регистрируются повсеместно. С ними ассоциируется 25% всех гастроэнтеритов у детей до года, 60% — в возрасте 1-3 года, 40% — у детей 4-6 лет. Отмечены семейные очаги ротавирусной инфекции, в детских дошкольных учреждениях и клиниках. Вспышки инфекции в условиях клинических стационаров — достаточно частое явление.

Патогенез заболевания. Вирус репродуцируется в эпителии 12-перстной кишки, вызывает повреждение эпителия и соответственно воспаление слизистой. Инкубационный период составляет 24-96 часов. Клинически заболевание проявляется рвотой (2-6 суток), выраженным диарейным синдромом (48-72 ч), лихорадкой до 38,9°С. У детей младшего возраста возможна дегидратация организма. Гастроэнтериты доминируют среди детей в возрасте от 6 до 24 месяцев. Возможно присоединение вторичной вирусной и бактериальной инфекции.

Лечение и профилактика. Лечение симптоматическое. Средства специфической профилактики разрабатываются. Применяются методы неспецифической профилактики инфекции.

Лабораторная диагностика вирусных гепатитов

В настоящее время в категории вирусных гепатитов рассматривается 8 самостоятельных нозологических форм: гепатиты A, B, C, D, E, F, G, пост-трансфузионный.

По путям передачи вирусные гепатиты делят на энтеральные, передающиеся фекально-оральным путем (к ним относятся гепатиты А, Е и, очевидно, F), и парентеральные, передающиеся через парентеральные манипуляции, включая, в естественных условиях, трансплацентарный и половой пути передачи (к ним относятся гепатиты В, С, D, G, посттрансфузионный).

Наибольшее распространение получили гепатиты А, В и С, сравнительная характеристика которых представлена в таблице 9.

I. Гепатит А (ГА). Лабораторная диагностика ГА основывается на выявлении самого возбудителя (метод ИЭМ), его антигенов (РИА, ИФА, ИФ) или антител к вирусу ГА (РИА, ИФА), фрагментов генома (ПЦР). Для ранней диагностики заболевания, а также выявления источников инфекции, используется определение антигена вируса ГА в фекалиях больных, где он появляется за 7-10 дней до клинических симптомов и в первые дни заболевания.

Таблица 9

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: