Технологические основы сушки биопрепаратов.

Лиофильная сушка(сублимационная). Способ используется в области биотехнологии для лиофильной сушки биопрепаратов. Способ включает введение в раствор биопрепарата перед сушкой защитной среды с последующим замораживанием полученной смеси и вакуумной сушкой. В состав защитной среды дополнительно вводят вещество-наполнитель, кристаллизующееся при замораживании его разбавленного водного раствора, в концентрации, достаточной для формирования аморфно-кристаллической структуры в объеме жидкой фазы биопрепарата, остающейся после кристаллизации воды.

Процесс лиофилизации условно можно разделить на две фазы:

1.загрузка раствора во флаконах, ампулах или лотках на полки рабочей камеры с последующей глубокой заморозкой продукта до -40 -50С . Чем быстреее достигается заданная тимпература тем мен6ьше размер кристалов льда и и они быстрее испаряются на этапе сушки.

2.испарение льда зи замороженнного раствора и оседание его в конденсоре

Контактная сушка я вляется распространенным способом подготовки биоматериалов к длительному хранению. При этом микробную биомассу смешивают с защитной средой и носителем и высушивают при умеренной тимпературе 35-40С. В отличае от лиофильной сушки при этом методже микробные клетки не подвергаются воздействию низких тимператур, что позволяет существенно увеличить их выживаемость. Но с другой стороны сохраняется повреждающее воздействие на микроорганизмы за счет их обезвоживания. Таким образом численность мо после высушивания может быть значительно ниже чем до сушки. Этот недостаток может быть устранен как и в случае лиофилизации путем использования различных защитных средств: растворов, содержащих вещества, снижающие повреждающее действие обезвоживания.

87.Технология приготовления инактивированных вакцин.

Инактивированные вакцины - это иммунопрепараты, в которых содержатся микроорганизмы, обработанные таким образом, что потеряли способность к размножению.
Для их изготовления используют эпизоотически актуальные вирулентные микроорганизмы. Инактивированными они называются потому, что возбудители подвергаются такой обработке, которая приводит к необратимой утрате способности к воспроизведению (репродукции, размножению), но при этом сохраняются антигенные и иммуногенные свойства. Технология производства инактивированных вакцин гораздо сложнее, по сравнению с производством живых вакцин и состоит из следующих этапов;
выбор производственного штамма,
оптимизация процесса культивирования,
инактивация и очистка или, наоборот, очистка и инактивация, добавление адъювантов,
внутрицеховой контроль,
расфасовка, маркировка, контроль в ОБК, передача на склад готовой продукции с последующей отправкой потребителям.

Производственный штамм выбирают на основании изучения, в основном, культуральных свойств и определяется доступностью субстрата для репродукции вирусов и величиной биологической активности. Чем выше вирулентность выбранного штамма, тем более иммуногенным будет препарат вакцины. Наименее подходящим субстратом для культивирования вирусов являются чувствительные животные. Виру с содержащую жидкость осветляют низкоскоростным центрифугированием для удаления клеток или фильтрованием через глубинные или мембранные фильтры, затем концентрируют с использованием ультрафильтрации на установках или ультрафильтрацией в полых волокнах. В результате очистки удаляется основная масса балластных белков, а в результате концентрирования уменьшается объем вируссодержащей суспензии в 2-10 раз. Полученная в результате такой обработки вируссодержащая суспензия подвергается инактивации. Для инактивации используют физические и химические методы. Из физических воздействий используют ультрафиолетовое облучение, ионизирующую радиацию, реже обработку ультразвуком. Однако для практики в технологии создания инактивированных вакцин наиболее широкое применение получили химические инактиваторы такие, как: формальдегид, р-пропиолактон, этиленимины, гидроксиламин, фенол и др. Основным требованием к инактиваторам является их полная безопасность в выбранных дозах для животных и человека. Они должны надежно инактивировать биологическую активность возбудителя, но сохранить антигенную и иммуногенную активность. Оставшийся инактиватор должен либо подвергнуться самораспаду, или быть нейтрализован, а продукты нейтрализации оставаться безопасными, т.е. не реактогенными и не токсичными. После проведения процесса инактивации проводят контроль на остаточную вирулентность. Инактивация должна быть полной. При проведении инактивации, наряду с воздействием инактиватора на геном возбудителя, он в какой то мере воздействует и на иммунопротективные белки, снижая их антигенную и иммуногенную активность. С целью усиления иммуногенной активности в технологию изготовления инактивированных вакцин включена стадия добавления адъювантов. Под адъювантами понимают вещества разнообразной химической природы, неспецифически стимулирующие иммунный ответ к различным антигенам. В качестве адьювантов используют:

а) неорганические вещества - гидроокись алюминия, фосфат алюминия, алюмокалиевые квасцы, аэросил и др.,

б) органические вещества - минеральные масла, альгинаты, сапонин, ДЭАЭ-декстран;

в) бактериальные клетки - коклюшные бактерии - Bordetella pertussis, вакцинный штамм микобактерий туберкулеза- БЦЖ; г) сложные адъюванты - полный и неполный адъювант Фрейнда. Полный адъювант состоит из Арлацела- эмульгатор, производное олеиновой кислоты и маннита (1,5 мл), и Байола- производное ланолина (8,5 мл) с добавлением БЦЖ (5 мг на 10 мл). В неполном адъюванте Фрейнда отсутствуют микобактерий туберкулеза.

В последние годы синтезированы вещества, используемые в качестве адьювантов, не имеющие природных аналогов, - этомурамилдипептид, полианионы, поликатионы, полиоксидоний. К адъювантам предъявляются следующие требования: они должны быть не токсичными в используемых дозах, не вызывать побочных реакций в организме, сами не должны обладать антигенной активностью, стимулировать развитие длительного гуморального и клеточного иммунитета. После добавления адъюванта вакцину тщательно перемешивают и контролируют на:
- отсутствие посторонних контаминантов, - безвредность,
- реактогенность,
- антигенную и иммуногенную активность.

При получении результатов, предусмотренных нормативно-технической документацией, а изготовление и контроль осуществляется в соответствии с Инструкцией по изготовлению и контролю вакцины и Техническими условиями, вакцину расфасовывают, маркируют, определяют иммунизирующую и прививочную дозы. Под иммунизирующей дозой понимают минимальное количество вакцины в мл, создающих иммунитет или определенный уровень антител у 50 % привитых животных. Прививочная доза содержит несколько иммунизирующих доз и должна вызывать иммунитет более чем у 80 % животных. Конкретный процент защиты может варьировать и приближаться к 90-95%.

88.Изготовление гипериммунной сыворотки. Гипериммунная сыворотка— сыворотка, которая содержит антитела в наиболее высоком количестве, по сравнению с иммунной сывороткой, это достигается благодаря повторной иммунизации питомца.Гипериммунная сыворотка необходима для обеспечения пассивного иммунитета в предельно короткие сроки, например при операциях мочеполовой системы (если животное предварительно не вакцинировано), а так же необходима для экстренного лечения при быстро развившейся болезни. проводят отбор штаммов ,и отобрать наиболее вирулентный и иммунногенный для получения сыворотки;гипериммунизации кроликов для получения гипериммунной сыворотки; подобрать наиболее оптимальный режим консервирования и лиофилизации гипериммунных сывороток;

89.Технология приготовления диагностических сывороток(агглютинирующих, преципитирующих, антитоксических, флуоресцирующих) Аглютинир.сыворотки готовят путем гиперимунизации ж-х разл.Аг.Бактериофаги выращ.на плотных пит средах,18-20ч 37градусов кульвируют,затем смывают физ р-ром.Преципитир сыворотки-для диагн сиб язвы.Штаммы выращ на горох огаре,18-20ч 37градусов,затем смыв.физ р-ром,фильтруют.Лошадей иммуниз-т,после послед.иммуниз берут кровь.Из крови получают сыв. с послед.сепарированием и консерв.0,5проц р-ром фенола.Выдерж 2 мес,стерил.фильтрацией,разливают во флаконы,закр резин прбкой и алюмин.колпачком.Для изгот флюоресцирующих сывороток использ доноров-кроликов,их многократно иммунизируют соотв Аг,затем получ сыворотки,осаждают глобулинысульфатом аммония.Разлив в ампулы и лиофизируют.Антигены-диагностикумы изгот из живых или взвеси убитых м.о.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: