Гуморальные факторы противовирусного иммунитета.

Характеристика семейства Поксвирусов.

Поксви́русы (лат. Poxviridae; англ. рох — «оспа» + вирусы; син. вирусы группы оспы) — семейство вирусов животных, объединяющее самые крупные ДНК-содержащие вирусы, вирионы которых имеют кирпичеобразную или овоидную форму; включает виды, патогенные для человека, например, возбудителей оспы, пустулезного дерматита.Геном, представленный двунитчатой линейной гантелеобразной формы ДНК, покрыт двухслойным капсидом, между слоями которого находятся боковые тела. Поверх нуклеокапсида расположена двухслойная липопротеидная оболочка с воронкообразными фибрами.Структура семейства:Подсемейство: Chordopoxvirinae (поксовирусы позвоночных)Род Orthopoxvirus (вирусы осповакцины, оспы).Род Parapoxvirus (вирус орфа)Род Avipoxvirus (вирус оспы кур)Род Capripoxvirus (вирус оспы овец)Род Leporipoxvirus (вирус миксомы)Род Suipoxvirus (вирус оспы свиней)Подсемейство: Entomopoxvirinae (поксовирусы насекомых; возможно три рода)Репродукция вируса.Поксвирусы обладают наиболее сложным репродуктивным циклом, при этом синтезируется более 100 различных белков, входящих в состав вирионов (большинство образует наружную оболочку). Репродукция поксвирусов характеризуется следующими особенностями.Транскрипция ДНК начинается до полной депротеинизации вируса, так как она полностью осуществляется вирусными полимеразами.Репликация происходит только в цитоплазме и полностью независима от клеточных полимераз, так как, в отличие от прочих вирусов, поксвирусы имеют собственную ДНК-зависимую РНК-полимеразу, которая обеспечивает считывание более половины вирусного генома в течение начальной и ранней стадий.В репродуктивном цикле выделяют три стадии — начальную, раннюю и позднюю:Начальная стадия репродукции поксвирусов запускается сразу же после раздевания вируса и выхода вирусной ДНК в цитоплазму.Ранняя стадия репродукции поксвирусов. На этом этапе транскрибируется примерно половина вирусной ДНК. Синтезируются ферменты, кодируемые «ранними генами» и участвующие в репликации вирусной ДНК. Параллельно в небольшом количестве образуются структурные белки.Поздняя стадия репродукции поксвирусов совпадает с началом репликации ДНК (что переключает механизмы транскрипции на считывание второй половины генома). Регуляторные белки блокируют трансляцию «ранней мРНК» и запускают синтез поздних (структурных) белков. Сборка вирионов осуществляется только в цитоплазме посредством реакций мембранного синтеза. Высвобождение зрелых популяций сопровождается лизисом клетки.

Сущность РСК и ее применение в диагностике вирусных заболеваний.

Цель: индикация, идентификация.

Системы:

1)исследуемая (вирусная суспензия; сыворотка)

2)стандартная сыворотка или стандартный антиген

3)комплемент – неспецифический фактор белковой природы, содержится в сыворотке крови. Больше всего в активном состоянии в организме морской свинки. Получают на биофабрике, перед постановкой реакции титруют.

Титр комплемента – наибольшее его разведение, необходимое для полного гемолиза эритроцитов в гемолитической системе.

Компоненты гемолитической системы: 1) эритроциты барана – 2,5% взвесь; 2) гемолизин (гемолитическая сыворотка).

Получают путем иммунизации кролика эритроцитами барана.

Сущность реакции: Если в исследуемой сыворотке имеются специфические антитела, то при добавлении антигена образуется комплекс антиген+антитело, который адсорбирует на своей поверхности комплемент. Образуется комплекс антиген + антитело + комплемент. Комплемента в свободном состоянии нет, при добавлении гемолизина к эритроцитам барана – гемолиза не происходит. Жидкость мутная, реакция положительная, животное больное.

Если в исследуемой сыворотке нет специфических антител, то при добавлении известного вируса комплекс не образуется. Комплемент в свободном состоянии, при добавлении гемолизина происходит гемолиз (эритроциты разрушаются) – жидкость становится прозрачной, реакция отрицательная, животное здорово.

7. Типы вируса ящура и их диагностикаВозбудитель: семейство Picornaviridae, род Aphtoviru, РНК содержащий, 32 капсомера, кубический тип симметрии. Восприимчивы КРС,свиньи, буйволы, верблюды, слоны.

Устойчивость: не чувствителен к эфиру. Дезинфицируется в 1%-ном растворе формальдегида.

Известно 7 серологических типов вирусов: А, О, С, SAT-1, SAT-2, SAT-3, Азия-1.

Дифференцируется: РН, РСК.

Патогенез: Входными воротками для вируса служат – слизистые оболочки ротовой полости и дыхательных путей. В местах внедрения образуются первичные афты.

Клинические признаки: Инкубационный период 3-7 суток,течение острое, у взрослых иногда абортивное.различают добро/здлкачественные формы.при доброкачественной-у крс замедл жвачка, гиперсаливация, повыш темп тела, слизистая рта горячая, сухая,гиперемированная, на 2-3 день появл афты,через 24 ч лопаются,обрзаую болезненные эрозии. При доброкачественной-на 7 день ухудшение осстояния,признаки пораж НС,мышечная дрожь,гибель от паралича сердца. Характерный признак – везикулярное поражение слизистых оболочек рта, кожи венчика и вымени. Вначале повышается саливация и температура. На 2-3 сутки появляются афты (серозные воспаления)

Диагноз ставится на основе: эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных.

Патологический материал: кровь, стенки и содержимое афт; На вирусоносительство – соскобы со слизистой оболочки глотки или пищевода.

Лабораторная диагностика: отправляют кровь,сыворотку,молоко, сдержимое невскрывшихся афт, 1) эксперсс-методы: РИФ, РСК,Рн.

Иммунитет у переболевших 8-12 мес,видоспецифичный,гуморальный,

Классификация культур клеток и ее применение. Техника получения культур клеток.

Культура клеток – это биологическая живая система, живущая и размножающаяся вне организма. Получают из свежих органов и тканей от здоровых животных, преимущественно из эмбрионов.

Классификация:

1) первично трипсенизированная: получают из паренхиматозных органов эмбрионов здоровых животных, путем разрушения соединительно тканных мостиков между клетками, путем разрушения ферментами (трипсин). И последующим выращиванием (культивированием) в питательной среде. Срок жизни 1-1,5 месяца. Выдерживает 10-12 пассажей.

2) диплоидная культура клеток: получают из первой, в которой сохраняется диплоидный набор клеток. Срок 8-10 месяцев. Количество заражений 50.

3) перевиваемые: выдерживают многочисленные пассажи. Клетки характеризуются безудержным ростом и измененным метаболизмом, как правило получают из опухолевых тканей.

4) суспензионная культура клеток: выдерживает 10 пассажей. Срок 2 недели, клетки плавают во взвешенном состоянии в питательной среде.

5) органная культура: получают из свежих органов, путем измельчения кусочков (размер 1-4 мм), плавающие в питательной среде.

Цели использования:

1) для первичного выделения вируса из патологического материала

2) для поддержания вируса в лабораторных условиях

3) для накопления вирусной массы при производстве вакцин

4) для титрования вируса

5) как тест объект в реакции нейтрализации

Культуру клеток – готовят из любых органов и тканей, но чаще используют эмбрионы (возраст 10-15 суток).

У эмбриона удаляют голову, крылья, лапы, оставляем кожно-мускульный мешок. Отмываем от слизи и крови (солевым раствором). Измельчаем ножницами и помещаем в плоскодонную колбу. Добавляем теплый раствор трипсина, стерильный магнит и помещаем на магнитную мешалку на 20 минут. Трипсин сливаем, наливаем новую порцию и на мешалку. Повторяем в течении часа до полного истощения ткани.

Затем колбу в холодильник (20-30) минут. Потом фильтруют в центрифужную пробирку. Центрифугируют при 3000-4000 об/мин, 20 минут. Сливают трипсин и вносят в питательную среду. Разливают по пробиркам по 1,5 мм культуры и помещают в термостат под углом 5-7⁰ , Т=37⁰С на 3-5 дней. До образования хорошего монослоя.

Гуморальные факторы противовирусного иммунитета.

Неспецифическую защиту организма обеспечивают пропердин, ингибиторы в сыворотке крови, гормоны.

Пропердин (гамма – глобулин) содержится в нормальной сыворотке крови и принимает участие в нейтрализации вирусов.

Ингибиторы – это неспецифические противовирусные вещества белковой природы, которые присутствуют в нормальной сыворотке крови, секретах эпителия слизистых оболочек дыхательного и пищеварительного трактов, в экстрактах органов и тканей. Они обладают способностью подавлять активность вирусов вне чувствительной клетки: при нахождении вируса в крови и жидкостях. Ингибиторы подразделяются на термостабильные и термолабильные. Ингибиторы обладают универсальной вируснейтрализующей и антигемагглютинирующей активностью в отношении многих вирусов.

Различают ингибиторы тканей, секретов и экстрактов. Такие ингибиторы оказались активными в отношении многих вирусов.

Механизм действия ингибиторов заключается в соединении их с вирусами, при этом происходит нейтрализация вирусных рецепторов, что выражается в понижении их физико-химических адсорбционных свойств.

Защитная функция ингибиторов, так же как и антител, зависит от природы вируса и его количества, от активности самих ингибиторов.

Гормоны могут опосредованно влиять на резистентность к вирусным антигенам. На проникшие же в клетки вирусы действуют так называемые киллеры, представляющие собой клетки крови (малые лимфоциты).

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: