Фенолят железа молочная кислота

(СН₃ СНОН СOO)₃Fe + 3С₆Н₅ОН

Лактат железа фенол

К 15 каплям слюны добавляют по каплям реактив Уффельмана (20 капель 1% раствора фенола + 2 капли 1% раствора хлорного железа до появления фиолетового цвета). В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска жидкости переходит в желто-зеленую, так как образуется лактат железа. Для сравнения проводят реакцию Уффельмана с раствором молочной кислоты и наблюдают появление желто-зеленого окрашивания.

Выделение муцина из слюны, определение в нем углеводного компонента.

Теория вопроса. Синтез муцина и роль сиаловой кислоты в изменении вязкости слюны.

Муцин - гликопротеин слюны, который покрывает поверхность зуба и выполняет защитную функцию. Белковая часть представлена в основном аминокислотами «тре» и «сер»: до 200 аминокислотных остатков. Полисахаридная часть представлена галактозамином, сиаловой кислотой, фукозой. Полисахариды присоединяются к белку О-гликозидной связью через «сер» и «тре».

В начале синтеза происходит встраивание N-ацетилгалактозамина в О-гликозидную связь с «тре» или «сер» при помощи трансферазы. Синтез муцина происходит в результате последовательного действия двух галактозотрансфераз, сиалотрансферазы, фукозилтрансферазы и наконец, еще одной N-ацетилгалактозаминтрансферазы. Каждая из пяти глюкозил- трансфераз связана с мембранами аппарата Гольджи слюнных желез, и совместно они завершают синтез муцина, после того, как было синтезировано белковое ядро на шероховатом ретикулуме эндоплазматической сети, до момента начала секреции муцина. Его выделяется до 270 мг на 100 мл слюны.

Агрегаты муцина образуют структуры, отличающиеся значительной протяженностью, прочно удерживая воду внутри молекулы матрикса. Благодаря этому растворы муцина обладают значительной вязкостью. Удаление сиаловой кислоты значительно снижает вязкость растворов муцина. Муцин склеивает пищевой комок и делает его скользким, что облегчает его проглатывание. Его крупные молекулы предотвращают прилипание бактерий к поверхности зуба и защищают ткани от физического повреждения и температурных перепадов. Углеводы в муцине слюны можно обнаружить реакцией Молиша.

Ход работы. В пробирку собирают 1-2 мл слюны и по каплям приливают концентрированную уксусную кислоту (10-20 капель). Выпадает осадок муцина. Осторожно сливают жидкость из пробирки, а осадок в виде сгустка слегка высушивают фильтровальной бумагой. Со сгустками муцина проделывают реакцию Молиша, доказывающую присутствие углевода в белке.

Качественная реакция Молиша.

К сгустку муцина добавляют 3 капли 1% спиртового раствора тимола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно приливают 20-30 капель концентрированной серной кислоты. При встряхивании на дне пробирки образуется продукт конденсации фурфурола с тимолом красного цвета.

11. Обнаружение белка в кости и зубе.

Теория вопроса. Большая часть белков твердых тканей зуба представлена коллагеновыми белками. Нерастворимые белки эмали относятся к коллаген и керамидоподобным белкам с большим количеством серина, глицина, лизина и оксипролина. Эти белки играют защитную роль в процессе деминерализации. Органическое вещество эмали образуют в основном белки - амелогенины, основная функция этих белков — формирование нерастворимой органической матрицы эмали, которая затем минерализуется благодаря особому кальцийсвязывающему белку эмали.

Кальцийсвязывающие белки эмали содержат ионы кальция в нейтральной и слабощелочной среде и способствуют проникновению кальция из слюны в зуб и обратно. На долю указанных белков эмали приходится 0,9% от общей массы эмали. Белковый матрикс дентина составляет 20% от общей массы дентина, где на долю коллагена приходится 35% от всех органических веществ дентина. Основная часть цемента представлена бесклеточным цементом, верхушка зуба - клеточный цемент. Клеточный цемент напоминает кость, но больше содержит магния, а бесклеточный цемент состоит из коллагеновых волокон и аморфного вещества, склеивающего эти волокна. Белки эмали, дентина и цемента обеспечивают минеральный обмен в твердых тканях зуба. Примерно 95% органического матрикса приходится на коллаген, который вместе с минеральными компонентами обеспечивает механические свойства кости. Для коллагена кости характерно повышенное содержание фосфата. В сухом деминерализованном матриксе содержится около 17% неколлагеновых белков, среди которых находятся протеогликаны. Они непосредственно участвуют в процессах оссификации кости. В слюне обнаружены специфические белки-саливопротеины, способствующие отложению фосфориокальциевых соединений на зубах и фосфопротеин- кальцийсвязывающий белок с высоким сродством к ГАП, участвующий в образовании зубного камня и зубного налёта. Разнообразие и специфичность существующих белков в природе определяется аминокислотным составом и генетически точно заданной аминокислотной последовательностью в полипептидной цепи. Значение цветных реакций состоит в том, что они дают возможность обнаружить присутствие белка в биологических жидкостях и установить аминокислотный состав различных природных белков. Эти реакции применяются как для качественного, так и для количественного определения белка и содержащихся в нем аминокислот. Универсальной реакцией на белки является раннее изученная нами биуретовая реакция.

Ход работы. Небольшие измельченные кусочки кости и зуба помещают в 2 пробирки и добавляют по 10 капель 10% раствора едкого натрия. Содержимое пробирок нагревают до кипения. Белки кости и зуба при нагревании растворяются в щелочи и могут быть обнаружены в растворе с помощью универсальной реакции на белки – биуретовой. Появление сине-фиолетового окрашивания свидетельствует об образовании биуретового комплекса.

Осаждение белков кости и зуба солями тяжелых металлов и концентрированными минеральными кислотами.

Теория вопроса. Белки - высокомолекулярные полимерные органические соединения, состоящие из аминокислот. Важным свойством белков является неустойчивость к действию повреждающих факторов. При этом происходит процесс денатурации белка. Денатурация белка сводится к разрушению вторичной, третичной, четвертичной структур белка и потере им биологических свойств. При денатурации белков обычно наблюдаются уменьшение или полная потеря специфической биологической активности белка, уменьшение растворимости, изменение формы и размеров молекулы, выход на поверхность молекулы белка гидрофобных групп. К необратимым реакциям относятся: осаждение белка солями тяжелых металлов, минеральными и органическими кислотами, алкалоидными реактивами, осаждение при кипячении. Осаждение белков солями тяжелых металлов, в отличие от высаливания, происходит при небольших концентрациях солей. Белки при взаимодействии с солями тяжелых металлов (свинца, меди, серебра, ртути и др.) адсорбируют их, образуя солеобразные и комплексные соединения, растворимые в избытке этих солей (за исключением AgNO₃, HgCl₂), но нерастворимые в воде. Растворение осадка в избытке солей называется адсорбционной пептизацией. Данное явление происходит вследствие возникновения одноименного положительного заряда на частицах белка. Способность белка прочно связывать ионы тяжелых металлов в виде нерастворимых осадков в воде используется как первое противоядие при отравлении солями ртути, меди, свинца и др. Сразу после отравления обычно применяют белки молока или яиц, пока еще эти соли находятся в желудке и не успели всосаться. После того как дали белок, у больного вызывают рвоту, чтобы удалить яд из организма.

Концентрированные минеральные кислоты вызывают денатурацию белка и образуют комплексные соли белка с кислотами. Ортофосфорная кислота осадков не дает. В избытке всех минеральных кислот, за исключением азотной, выпавший осадок белка растворяется. Качественная реакция с концентрированной азотной кислотой лежит в основе количественного определения белка в моче по методу Робертса - Стольникова - Брендберга. В клинической практике реакции осаждения белков реактивами, вызывающими денатурацию, используют в тех случаях, когда для исследования необходимо получить безбелковый фильтрат или установить наличие белка в биологической жидкости, гомогенатах ткани зуба и кости.

Ход работы: Осаждение белков солями тяжелых металлов.

В 3 пробирки наливают по 5 капель раствора гомогената ткани зуба или кости и добавляют в первую пробирку 1-2 капли раствора сульфата меди, во вторую - 2 капли 5% раствора ацетата свинца, а в третью - 1-2 капли 5% раствора нитрата серебра. Во всех пробирках образуется осадок, нерастворимый в воде. При добавлении в первую пробирку 5-10 капель 1% раствора сульфата меди наблюдают растворение бледно-голубого осадка в избытке реактива. Во второй пробирке при добавлении 5-10 капель 5% раствора ацетата свинца, происходит растворение осадка. В третьей пробирке при добавлении 5-10 капель 5% раствора нитрата серебра, растворения осадка не происходит.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: