Сделай Сам Свою Работу на 5

Лабораторно-практическое занятие № 2





 

Фармацевтический анализ лекарственных средств группы аминокислот алифатического ряда

 

Цель: Освоить методы контроля качества лекарствен­ных средств группы аминокислот алифатического ряда и их производных по показателям «описание», «подлинность», «чистота», «содержание действующего вещества».

Структура занятия:

1. Семинар - 90 мин

2. Контрольный тест - 15 мин

3. Лабораторная работа – 45 мин

4. Защита лабораторной работы – 30 мин.

Аминокислоты представляют собой производные карбоновых кислот, содержащие в молекуле одну или несколько аминогрупп. a - Аминокислоты являются структурными элементами белков и широко распространены в природе.

Аминокислоты являются амфотерными соединениями и способны образовывать внутренние соли в виде биполярного иона (цвиттер-иона):

 

Их оснóвные свойства обусловлены присутствием NН2-группы, а кислотные – СООН-группы:

 

Общегрупповыми реакциями являются:

1) Реакция образования комплексной соли меди(II):

темно-синий

 

Это координационное соединение мало растворимо в воде, что позволяет выделять аминокислоты из смеси с другими веществами.



2) Нингидриновая реакция является одной из старейших (1910), но широко применяемых и до сих пор, цветных реакций на a-аминокислоты (Н.А.Тюкавкина, 2008). Тем не менее природа всех образующихся окрашенных продуктов до сих пор окончательно не установлена. Упрощённо схема реакции может быть представлена следующим образом:

Продукт нингидриновой реакции имеет сине-фиолетовый цвет, что используется для визуального обнаружения аминокислот на хроматограммах (на бумаге, в тонком слое сорбента), а также спектрофотометрического определения на аминокислотных анализаторах (продукт поглощает свет в области 550-570 нм). Эта реакция неспецифична, так как окрашенные продукты с нингидрином дают b-аминокислоты, аммиак, первичные и вторичные амины, мочевина, белки и ряд других соединений, содержащих аминогруппу.

Программа по дисциплине «Фармацевтическая химия» включает следующие ЛС: кислота глутаминовая, , цистеин, ацетилцистеин, метионин, пеницилламин; натрия кальция эдетат (кальций-динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, тетацин-кальций); пирацетам (Ноотропил) как аналог гамма-аминомасляной кислоты; кислота g-аминомасляная (Аминалон); производные пролина: каптоприл, эналаприл; кислота аминокапроновая; мелфалан – производное фенилаланина.



 

Кислота глутаминовая (Acidum glutaminicum)

(S)-2-аминопентан-1,5-диовая кислота

 

С5Н94 Мr 147,1

 

Глутаминовая кислота относится к фармакологической группе психостимуляторы и ноотропы. Применяется при лечении заболеваний центральной нервной системы: эпилепсии, психозов, реактивных состояний, протекающих с явлениями истощения, депрессии.

 

Описание. Глутаминовая кислота представляет собой белый кристаллический порошок, легко растворимый в горячей воде, мало растворимый в холодной воде, практически нерастворимый в уксусной кислоте, ацетоне и спирте.

 

Определение подлинности проводят физическими, физико-химическими и химическими методами:

Методом поляриметрии определяют удельное вращение 10% раствора глутаминовой кислоты в разведенной HCl: [α] от +30,5 до +32,5о.

ИК-спектр субстанции, полученный методом прессования с KBr, по интенсивностям и частотам полос должен быть идентичен спектру стандартного образца кислоты глутаминовой.

Метод ТСХ: пятно на хроматограмме, полученное для субстанции, должно быть идентично по положению, цвету и размеру пятну, полученному для стандартного образца глутаминовой кислоты. Для проявления пятен хроматограммы опрыскивают раствором нингидрина.

Один из методов определения подлинности кислоты глутаминовой заключается в следующем: к 2 мл 10% раствора глутаминовой кислоты в 1 моль/л HCl добавляют 0,1 мл фенолфталеина (раствор остается бесцветным). При добавлении 3,0 мл того же раствора глутаминовой кислоты к 3,5 мл раствора 1 моль/л NaOH в присутствии фенолфталеина появляется красное окрашивание. К нему добавляют смесь, состоящую из 3 мл раствора формальдегида и 3 мл дистиллированной воды. Красная окраска постепенно переходит в розовую, а затем совсем исчезает.



Наблюдаемые явления объясняются следующим образом.

Поскольку аминокислота – амфотерное соединение, добавление щелочи к ее раствору не приводит к полной нейтрализации раствора (нейтрализуется только одна из двух карбоксильных групп):

Окраска раствора остается красной (щелочь не полностью нейтрализована).

При добавлении раствора формальдегида протекает реакция Серенсена:

При блокировании аминогруппы глутаминовой кислоты увеличиваются ее кислотные свойства. Это приводит к полной нейтрализации щелочи за счет протекания реакции со второй карбоксильной группой:

При этом окраска раствора исчезает полностью.

Оценка чистоты.Раствор кислоты глутаминовой (10%) в 1 моль/л растворе HCl должен быть прозрачным и бесцветным.

Родственные примеси, дающие положительную нингидриновую реакцию определяют методом ТСХ.

Допустимыми примесями являются: хлориды, сульфаты, ионы аммония, железа, тяжелые металлы. Кроме того, определяют потерю в массе при высушивании и сульфатную золу.

 

Количественное определение проводят методом нейтрализации.

Глутаминовую кислоту титруют 0,1 моль/л раствором гидроксида натрия. Индикатор - бромтимоловый синий. В точке эквивалентности, соответствующей моменту нейтрализации одной карбоксильной группы, наблюдается переход окраски из желтой в голубую.

1 мл 0,1 моль/л раствора NaOH соответствует 14,71 мг С5Н94.

Метионин (Methioninum)

(S)-2-амино-4-(метилтио)бутановая кислота

 

C5H11NO2S Мr 149,2

 

Метионин относится к фармакологической группе: белки и аминокислоты, гепатопротектры.

Применяют при заболеваниях печени (цирроз, алкогольная гепатопатия, токсический гепатит), а также для лечения дистрофии, возникающей в результате белковой недостаточности.

Описание. Метионин представляет собой белый или почти белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы. Растворим в воде, очень легко растворим в спирте, практически нерастворим в эфире.

 

Определение подлинности проводят методом поляриметрии: удельное вращение 2% раствора метионина в хлороводородной кислоте [α] от +22,50 до +24,00.

ИК-спектр метионина должен соответствовать спектру стандартного образца метионина:

Методом хроматографии в тонком слое (ТСХ) анализируют подлинность и чистоту ЛС. Полученную хроматограмму проявляют раствором нингидрина.

Оценка чистоты.Водный раствор метионина (2,5%) должен быть прозрачным и бесцветным и иметь рН от 5,5 до 6,5.

В субстанции метионина допустимыми примесями являются: хлориды, сульфаты, ионы аммония, железа, тяжёлых металлов. Потеря в массе при высушивании - не более 0,5%.

 

Количественное определение проводят методом неводного титрования. Субстанцию растворяют в ледяной уксусной кислоте. Титрант – 0,1 моль/л HСlO4. Точку эквивалентности определяют потенциометрически.

1 мл 0,1 моль/л раствор HСlO4 эквивалентен 14,92 мг метионина.

 

Цистеина гидрохлорид (Cysteini hydrochloridum)

(R)-2-амино-3-меркаптопропановой кислоты гидрохлорид

C3H7NO2S×HCl×H2O Mr 175,6

 

Цистеин относится к фармакологической группе: белки и аминокислоты. Цистеин участвует в обмене веществ хрусталика глаза, а изменения, происходящие при катаракте, обусловлены нарушением содержания в нём данной аминокислоты. По этой причине предложено применять цистеин для задержки развития катаракты.

Описание.Белый кристаллический порошок, легко растворимый в воде, мало растворим в спирте, практически нерастворим в эфире.

Определение подлинности проводят физическими, физико-химическими и химическими методами:

Методом поляриметрии определяют удельное вращение 8% раствора цистеина гидрохлорида в разведенной хлороводородной кислоте: [α] от +5,5о до +7,0о.

ИК-спектр субстанции, полученный методом прессования с KBr, по интенсивностям и частотам полос должен быть идентичен спектру стандартного образца цистеина гидрохлорида.

При использовании хроматографии в тонком слое основное пятно на хроматограмме, должно быть идентично по положению, цвету и размеру пятну, полученному для стандартного образца цистеина гидрохлорида. В качестве проявителя используют раствор нингидрина.

При добавлении к щелочному раствору субстанции раствора натрия нитропруссида появляется интенсивное фиолетовое окрашивание, переходящее сначала в красно-коричневое, а затем в оранжевое. Окраска обусловлена формированием координационных соединений разного состава. При добавлении хлороводородной кислоты окрашивание переходит в зелёное.

Хлорид-ионы обнаруживают по реакции с раствором серебра нитрата.

 

Оценка чистоты. Родственные примеси, дающее положительную нингидриновую реакцию, определяют методом ТСХ.

Допустимыми примесями являются: сульфаты, ионы аммония и железа, тяжелые металлы, также определяют потерю в массе при высушивании и сульфатную золу.

Количественное определениепроводят методом обратного йодометрического титрования. Субстанцию цистеина гидрохлорида растворяют в воде, добавляют калия йодид, хлороводородную кислоту и избыток раствора йода. Смесь оставляют в темноте на 20 минут.

Избыток йода оттитровывают стандартным раствором тиосульфата натрия.

В качестве индикатора используют крахмал, который добавляют в конце титрования.

1 мл 0,05 моль/л раствора йода соответствует 15,76 мгC3H8ClNO2S.

 

 








Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту:



©2015 - 2024 stydopedia.ru Все материалы защищены законодательством РФ.