Систематика и характеристика возбудителя

ЛЕКЦИЯ

Методы лабораторной диагностики пастереллезов животных и бордетеллеза свиней.

ПЛАН

Методы лабораторной диагностики пастереллезов животных.

Методы лабораторной диагностики бордетеллеза свиней

Основная:

1. Справочник по бактериологическим методам исследований в ветеринарии,

/А.Э. Высоцкий, З.Н. Барановская/ Минск: Белтаможсервис, 2008. – 824 с.;

2. Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальные инфекции : Справочник / Сост. Б.И. Антонов, В.В. Борисова, П.М. Волкова [и др.]; под ред. Б.И. Антонова. – М.: Агропромиздат, 1986. – 352 с.

Дополнительная:

3. Частная эпизоотология / Учебник для студентов высших с.х. заведений; Под ред. В.В. Максимовича. – Минск: ИВЦ Минфина, 2009. – 564 с.

4. Инфекционные болезни животных / Б.Ф. Бессарабов, А.А. Вашутин [и др.]; Под ред. А.А. Сидорчука. – М.: КолосС, 2007. – 671 с.

5. Практикум по частной микробиологии: Учеб.пособие \А.А.Солонеко, А.А.Гласкович, В.Н.Алешкевич и др.- Мн.: Ураджай, 2000 – 250 с.

1. ПАСТЕРЕЛЛЕЗ – инфекционная контагиозная болезнь домашних, а также диких животных и птиц, характеризующаяся при остром течении явлениями септицемии с гемморагически воспалительными процессами на слизистых и серозных оболочках и во внутренних органах, крупозной пневмонией, плевритом, а при подостром и хроническом течении - гнойно-некротизирующей пневмонией, артритами, маститами, кератоконъюнктивитами, эндометритом, и иногда, энтеритом. К пастереллезу восприимчив и человек.

В настоящее время пастерелллез сельскохозяйственных животных и птиц имеет широкое распространение.

Систематика возбудителя и его характеристика

Царство Procariotae

Отдел 2. Gracilicutes

Сем. Pasteurellaceae

Род Pasteurellа (включает 15 видов)

Р. multocida

Род Manchemia (Pasteurellа)

М. haemolytiса

Ведущее этиологическое значение в инфекционной патологии животных и птиц принадлежит двум видам: P.multocida, М.haemolytica.

P.multocida является возбудителем геморрагической септицемии животных, холеры птиц, а также легочных пастереллезов, осложняющих респираторные инфекции вирусной и микоплазменной этиологии. Она включает 4 серологических варианта А, В, Д и Е. M. haemolytiса включает два биотипа А и Т, проявляется поражением органов дыхания чаще у молодняка.

Пастереллы неподвиж­ны, не образуют спор, но образует слизистую капсулу. В маз­ках из крови обнаружива­ют очень короткие биполярно окрашивающие­ся палочки, а в культурах - в виде мелких кокков и коккобактерий. Микробы грамотрицательны шириной 0,25-0,5 мкм длинной 0,5-1,5 мкм. М. haemolytiса по разме­ру несколько больше Р. multocida.

Пастереллы факультативные анаэробы, температурный оптимум 37+1⁰С. Плохо растут на обычных питательных средах, поэтому их культивируют на обычных средах или агаре и бульоне Хоттингера с добавлением с добавлением 5- 10% нормальной сыворотки крови лошади и 2 % раствором глюкозы.

Пастереллы условно патоген­ны. Они являются частыми обитателями верх­них дыхательных путей здоровых животных.

Диагноз на пастереллез устанавливают на основании комплекса эпизоотологические, клинических, патологоанатомических данных, результатов бактериологического исследования, включая заражение лабораторных животных.

Эпизоотологические данные.

К пастереллезу восприимчивы: все виды с/х животных, многие виды диких животных, а также все виды птицы. Молодняк более восприимчив, чем взрослые.

Источником возбудителя инфекции являются больные и переболевшие животные, которые длительное время (до 1-го года) вы­деляют возбудителя со слизью при кашле, с истечениями из но­совой полости, с испражнениями и мочой.

Факторами передачи могут быть продукты убоя, кожа и другое сырье от вынуждено убитых или павших животных, а также контаминированные пастереллами корма, вода, помещения, предметы ухода за животными.

Заражение происходит в основном аэрогенно, реже алиментарным путем и поврежденную ко­жу.

Течение и симптомы.Длительность инкубационного периода варьирует от нескольких часов до нескольких дней, в зависимости от вирулентности возбудителя и степени устойчивости животного. Течение болезни бывает сверхострое, острое, подострое и хроническое, а проявляться в виде отечной, легочной и кишечной форме. Сверхострый пастереллез характеризуются высокой лихорадкой, угнетением, учащенным дыханием и через несколько часов заканчивается смертью.

Патологоанатомические изменения.При сверхостром и ост­ром течении болезни обнаруживают изменения, свойственные септицемии, с множественными кровоизлияниями на серозных, слизистых оболочках и в паренхиматозных органах, наблюдается крупозная пневмония (на разрезе легкие имеют мраморный вид).

При подостром течении выявляют крупозную пневмонию и гастроэнтерит, при хроническом — резко выраженную крупозно- некротизирующуюся пневмонию с поражением более обширных участков органов.

Лабораторная диагностика. Предусматривает микроскопию мазков отпечатков, выделение возбудителя путем посева исследуемого материала на питательные среды или путем заражения наиболее восприимчивых лабораторных животных (белых мышей и кроликов) суспензий из исследуемых органов, идентификацию выделенной культуры (морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам) и определение ее патогенности.

При подозрении на пастереллез в лабораторию направляют только свежий материал не подвергавшихся лечению антибиотиками животных. Для посмертной диагностики отправляют кровь, кусочки селезенки, печени, почек, лимфатические узлы, трубчатую кость, кусочки легкого отобранного на границе здоровой и пораженной ткани. Прижизненно для исследования пробы смывов со слизистой носовой полости, при маститах - молоко из пораженной доли вымени.

В летнее время года (при длительной транспортировке) патологический материал необходимо замораживать, хранить в термосе со льдом или консервировать 30%-ным стерильным раствором глицерина.

Й ДЕНЬ

Микроскопический метод.

Из присланного материала делают мазки-отпечатки, окрашивают по Граму (обнаружения возбудителя, определения его морфологических свойств и грампринадлежности), синькой Леффлера (с целью обнаружения биполярности) и по Романовскому-Гимзе ( с целью обнаружения капсулы).

В положительном случае обнаруживают короткие с закругленными концами овоидные биполярные грамотрицательные палочки, шириной 0,25–0,5 мкм, длиной 0,5–1,5 мкм, часто имеющие четко выраженную капсулу.

Бактериологический метод.

Для выделения возбудителя из патматериала делают посевы на МПБ и МПА или агар и бульон Хоттингера обогащенные 5-10 % стерильной лошадиной сывороткой и 2 % раствором глюкозы, а также можно на глюкозо-кровяной МПА.

Посевы инкубируют в термостате при 37+1^оС 24-48 часов. При отсутствии роста пастерелл первичные посевы выдерживают в термостате до 4-5 дней при ежедневном их просмотре.

Биологический метод.

Также для выделения возбудителя из материала заражают лаб. животных. Для этого из материала готовят суспензию на стерильном физиологическом растворе в соотношении 1:5-1:10, которую вводят не менее 3-м белым мышам или одному кролику, которым суспензию вводят подкожно в дозе соответственно 0,3 мл и 0,5 мл.

Кролики за несколько дней до заражения должны быть проверены на пастереллоносительство методом провокации. Для этого в каждый носовой ход ежедневно три дня вводят 0,2-0,5%-й водный раствор бриллиантгрюна в дозе 0,2 мл. У животных пастереллоносителей через 18-24 после введения раствора появляется гнойного характера ринит. Кроликов носителей не используют.

Й ДЕНЬ

Просматривают посевы:

В положительном случае в жидких средах в первые 18-24 часов выращивания P. multocida дает легкое равномерное помутнение сред. На 2-4 день на дне пробирки образуется характерный слизистый осадок, поднимающийся при встряхивании пробирки в виде не разбивающейся косички с просветлением бульона.

На плотных средах образуются прозрачные, росинчатые колонии с ровными краями, диаметром 2-3 мм, позднее колонии становятся серо-белого цвета. Первичный рост может быть также в виде тонкого налета на поверхности среды. По внешнему виду различают три основных типа колоний: (М-форма) - слизистые, они более крупные, (S-форма) – гладкие, выпуклые, слегка опалесцирующех серовато-белые блестящие колоний с ровными краями и шероховатые (R-форма). Вирулентные штаммы пастерелл, выделенные их трупов животных и птиц, павших при остром течении болезни, чаще всего S и М форм. R-формы- у таких штаммов вирулентность понижена, иногда они авирулентны.

М. haemolytica на кровяном МПА образует слегка выпуклые, просвечивавшиеся, влажные, блестящие, колонии окруженные четкой зоной гемолиза.

Из изолированных колоний делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют с целью изучения (морфологических, тинкториальных свойств и чистоты культуры). Возбудитель имеет вид мелких, грамотрицательных, овоидных палочек.

Дальнейшую идентификацию чистой культуры проводят по биохимическим свойствам, с целью определения родовой и видовой принадлежности.

Бактериологический метод.

Для этого делают пересев чистой культуры на среды Гисса с сахарами и многоатомными спиртами (для определения сахаролитической активности); агар Симмонса (для определения усвоения цитратоаммонийных солей); агар Клиглера ( для определения образования сероводорода); среда с мочевиной (определение уреазной активности); МПБ ( определение образование индола – реакция Легаля –Вейля или бум. пропитанная щавелевой к); МПА (определение и постановки биопробы), ПЖА – для определения подвижности. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37±1⁰ С течение 7-10 дней. Учет результатов производят ежедневно.

Й ДЕНЬ

Просматриваем посевы:

Р. multocida неподвижна, ферментирует глюкозу, сахарозу, маннозу и маннит с образованием кислоты без газа, не ферментирует рафинозу, лактозу и мальтозу, образует сероводород и индол, не расщепляет мочевину, не растет на среде Симмонса.

P. haemolytica неподвижна, ферментирует глюкозу, сахарозу, лактозу, мальтозу, рафинозу и маннит, не ферментирует маннозу, не все штаммы образуют сероводород, не образует индол, не расщепляет мочевину и образует гемолиз на кровяном агаре.

Биологический метод.

С целью определения патогенности выделенных культур ставят биопробу. Для заражения 3-х белых мышей, массой 16-18 г, используют 18-24 часовую бульонную культуры пастерелл, которых заражают подкожно в дозе 0,2 см³.

Гибель белых мышей в течение 24-72 часов после заражения и выделении из органов павших животных исходной культуры дает основание считать биопробу положительной и заключить, что вспышка пастереллеза скорее всего обусловлена P. multocida серовар В (геморрагическая септицемия).

Пастереллы, участвующие в развитии легочного (вторичного) пастереллеза, вызывающие гибель инфицированных белых мышей суточной бульонной культурой в течение 4-7 суток являются слабовирулентными относятся к сероварам А или Д.

P. haemolytica может вызывать гибель белых мышей только при внутрибрюшинном заражении.

Диагноз на пастереллез считается установленным в следующих случаях:

- выделения из патологического материала культуры с характерными свойствами для пастерелл, патогенной для лабораторных животных.

- при гибели хотя бы одного лабораторного животного зараженного суспензией из патматериала, и выделении из его органов культуры с характерными свойствами для пастерелл, даже если при первичном посеве культуры не выделено.

Срок исследования до 10 суток.

1. Бордетеллез (синонимы: бордетеллез, бронхисептикоз, непрогрессивный атрофический ринит)– инфекционная болезнь, характеризующаяся развитием катарально-гнойной пневмонии и воспалением верхних дыхательных путей, сопровождающаяся сухим кашлем, чиханием, отставанием в росте и развитии. При сочетанном течении бордетеллеза и пастереллеза развивается атрофический ринит, который является одной из форм позднего проявления бордетеллеза. В настоящее время в нашей республике болезнь регистрируется в виде спорадических случаев.

Систематика и характеристика возбудителя

Царство Procariotae

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: