Контроль режима работы автоклава и сухожарового шкафа.

Стерилизация паром под давлением.

Лабораторную посуду перед стерилизацией необходимо тщательно вымыть, высушить, завернуть в бумагу. Чашки упаковывают в бумагу по одной или несколько штук. В верхние концы пипеток вставляют ватные тампоны, предупреждающие засасывание материала Градуированные пипетки заворачивают в длинные полоски бумаги шириной 5 см. На бумаге отмечают объем завернутой пипетки. В пеналах пипетки стерилизуют без дополнительного завертывания в бумагу.

Острые концы пастеровских пипеток запаивают в пламени горелки и заворачивают в бумагу по 3-5 штук.

Флаконы, колбы, пробирки закрывают ватно-марлевыми пробками. Пробка должна входить в горлышко сосуда на 2/3 длины, не слишком туго, но и не свободно. Поверх пробок на сосуд надевают бумажный колпачок. Пробирки связывают по 5-50 штук и обертывают поверх бумагой.

Контроль эффективности работы автоклава

Для контроля работы автоклава и режима стерилизации используют следующие методы:

1) физические - контактные манометры, установленные на автоклаве;

2) химические - различные химические вещества, имеющие определенную температуру плавления (бензойная кислота - 121°С, антипирин - 113°С, резорцин - 110°С);

3) бактериологические тесты. Пример: в пробирки с питательной средой засевают фильтровальную бумагу, зараженную спороносной культурой. 1-я пробирка («О») автоклавируется при оптимальном режиме, 2-я пробирка («К») не автоклавируется. Обе пробирки помещают в термостат при 37°С. Результаты регистрируют через 18-24 часа.

К работе № 2

Влияние химических факторов на микроорганизмы

Химические средства неспецифического действия, применяемые для обработки помещений, оборудования и различных предметов, обозначают термином «дезинфектанты», а вещества, используемые для обработки живых тканей -«антисептики».

Антисептики - антимикробные средства широкого спектра действия, оказывающие губительное или статическое влияние на микроорганизмы и обладающие высокой активностью. Антисептики должны сохранять активность в присутствии продуктов тканевого распада; не должно быть местного раздражающего фактора и угнетающего влияния на процессы заживления раны.

Антисептики подразделяются по механизму действия и по химической структуре:

1. Галогеносодержащие соединения (препараты йода и хлора). Взаимодействуют с микробными белками, что сопровождается их инактивацией и денатурацией.

2. Алкоголи или спирты (этанол, изопропанол и др.) вызывают обезвоживание, денатурацию белков и вымывание липидов из клеточной стенки.

3. Окислители (перекись водорода, калия перманганат) окисляют метаболиты и ферменты микроорганизмов, либо денатурируют белки.

4. Кислоты, щелочи и соли (борная, салициловая кислоты, раствор аммиака) диссоциируют при проникновении через клеточную оболочку и вызывают денатурацию белков цитоплазмы.

5. Соединения фенола (карболовая кислота, трикрезол) денатурируют белки и нарушают структуру клеточной стенки.

6. Альдегиды (формальдегид, лизоформ, цимизоль и т.д.) - за счет присоединения к аминогруппам белка происходит денатурация белка.

7. Красители (метиленовый синий, бриллиантовый зеленый) – избирательно окрашивают ткани и обладают бактерицидным действием, соединяясь с белком или пептидогликаном бактериальной клетки, приводят к развитию бактериостатического эффекта, а в высоких концентрациях – бактерицидного.

8. Производные нитрофурана (фурацилин) тормозят клеточное дыхание микроорганизмов, действуя на дегидрогеназы.

9. Детергенты (циригель, дегмицид) вызывают изменение проницаемости цитоплазматической мембраны.

К работе № 3

Микробный антагонизм.При посеве исследуемого материала или смеси микробов присутствие микробов-антагонистов обнаруживается по светлым зонам, окружающим их колонии. Эти зоны свидетельствуют о подавлении роста угнетаемого микроба, причем величина зоны угнетения определяет ту или иную степень активности антагониста. Механизмы микробного антагонизма: 1) разная скорость роста микроорганизмов; 2) синтез метаболитов: экзотоксинов и бактериоцинов.

Методика.

На чашку с МПА широкой полосой засевают суточную бульонную культуру E.coli М-17. Перпендикулярно посеву вплотную подсевают суточную бульонную культуру угнетаемого микроба (вибрион). Результат учитывают через сутки пребывания в термостате: рост угнетаемого микроба отступает от полосы, заселенной антагонистом.

Практическое значение антагонизма для медицины:1) использование микробов-антагонистов для производства антибиотиков; 2) применение пробиотиков (эубиотиков) - бактериальных препаратов, содержащих живых антагонистически действующих микроорганизмы, для угнетения патогенных и условно-патогенных микробов и лечения нарушений нормального микробиоценоза кишечника (дисбактериоза): колибактерин, бифидумбактерин, лактобактерин, бификол и т.д.

Схема описания пробиотиков:

Название препарата ………………….

Классификационное положение:пробиотик

Действующее начало: метаболиты - бактериоцины

Получение: из живых представителей нормальной микрофлоры организма человека,

высушенных лиофильно

Применение: для лечения дисбактериоза, нормализации кишечного микробиоценоза

Способ применения: перорально

К работе № 4

Диагностические и лечебно-профилактические бактериофаги.Применяемые на практике препараты бактериофагов представляют собой фильтрат бульонной культуры соответствующих микробов, лизированных фагом,содержащий живые частицы фага, а также растворённые антигены бактерий, освободившиеся из бактериальных клеток при их лизисе. Полученный препарат - жидкий бактериофаг должен иметь вид совершенно прозрачной жидкости жёлтого цвета большей или меньшей интенсивности.

Для применения с лечебно-профилактическими целями фаги могут выпускаться в форме таблеток с кислотоустойчивой оболочкой. Таблетированный сухой фаг более стабилен при хранении и удобен при применении. Одна таблетка сухого бактериофага соответствует 20-25 мл жидкого препарата. Срок годности сухого и жидкого препарата - 1 год. Жидкий бактериофаг следует хранить при температуре + 2 +10 С, сухой- не выше +1°С, но его можно хранить в холодильнике и при отрицательной температуре.

Принятый внутрь бактериофаг сохраняется в организме в течение 5-7 дней. Как правило, прием бактериофага не сопровождается какими-либо реакциями или осложнениями. Противопоказаний к приёму нет. Применяются в виде орошений, полосканий, примочек, тампонов, инъекций, а также вводят в полости - брюшную, плевральную, суставную и в мочевой пузырь, в зависимости от места локализации возбудителя.

Диагностические фаги выпускаются как в жидкой, так и сухой форме в ампулах. Перед началом работы сухой бактериофаг разводится. Если на ампулах указан титр, тр, ДРТ (доза рабочего титра) применяют в реакции фаголизабельности (метод Отто) для идентификации бактерий, если указан тип фага, то для фаготипирования– определения источника инфекции.

Действие бактериофага на микробную культуру в жидкой среде и на плотной среде

Опыт на плотной питательной среде

Делают густой посев газоном исследуемой культуры. Через 5-10 мин после посева на подсушенную поверхность питательной среды наносят жидкий диагностический фаг. Чашку слегка наклоняют, чтобы капля фага растеклась по поверхности агара. Чашку помещают в термостат на 18-24 часа. Учёт результата производят по полному отсутствию роста культуры в месте нанесения капли фага.

Опыт на жидкой питательной среде

Делают посев исследуемой культуры в две пробирки с жидкой средой. В одну пробирку («О») добавляют петлёй диагностический бактериофаг. Через 18-20 часов в пробирке, куда бактериофаг не добавлялся («К»), наблюдается сильное помутнение бульона — произошел рост посеянной культуры. Бульон в пробирке, куда был добавлен бактериофаг, остался прозрачным вследствие лизиса культуры под его влиянием.

Фаготипирование бактерий

По спектру действия различают следующие бактериофаги: поливалентные, лизирующие родственные виды бактерий; моновалентные, лизирующие бактерии определенного вида; типовые, лизирующие отдельные типы (варианты) бактерий.

Например, один штамм патогенного стафилококка может лизироваться несколькими типами фагов, поэтому все типовые фаги (24) и штаммы патогенных стафилококков объединены в 4 группы.

Метод фаготипирования имеет большое значение для эпидемиологического исследования, так как позволяет выявить источник и пути распространения возбудителей заболеваний. С этой целью определяют фаговар выделенной из патологического материала чистой культуры на плотных питательных средах с помощью типовых диагностических фагов.

Фаговар культуры микроорганизмов определяют по тому типовому фагу, который вызвал ее лизис. Выделение бактерий одного фаговара от разных обследуемых указывает на источник заражения.

Схема описания бактериофагов:

Название препарата…………………

Классификационное положение:бактериофаг

Действующее начало: бактериофаг

Получение: фильтрат фаголизата бульонной культуры соответствующего микроорганизма

Применение:

лечебно-профилактические - для лечения и профилактики соответствующих инфекций;

диагностические - для идентификации микроорганизмов; определения источника инфекции

Способ применения:в зависимости от назначения фага

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: