Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.
Модульная единица 1.2
Экология микроорганизмов
ЗАНЯТИЕ 1.2.1
Нормальная микрофлора организма человека. Дисбиозы
Цель занятия:
изучить доминантную и транзиторную микрофлору биотопов тела человека;
функции нормальной микрофлоры, причины формирования дисбиозов.
Студент должен знать:
1. Качественный и количественный состав нормальной микрофлоры организма человека, ее функции.
2. Факторы, оказывающие влияние на количественный и качественный состав нормальной
микрофлоры организма человека.
3. Методы изучения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры, критерии оценки.
4. Причины и условия возникновения дисбактериозов, их коррекция.
5. Развитие естественной микрофлоры у новорожденных и детей раннего возраста.
Студент должен уметь:
· проводить взятие материала для исследования микрофлоры организма человека;
· проводить оценку качественного и количественного состава микрофлоры.
Студент должен владеть:
· методами микробиологических исследований биоматериала из различных биотопов организма человека
Работа № 1. Микрофлора кожи
Цель:изучить микрофлору кожи.
Самостоятельная работа:оценить результаты посевов с кожи рук методом отпечатков на МПА и среду Эндо. Зарисовать, описать. Сделать вывод.
А) среда МПА
Описать культуральные свойства колоний, выросших на МПА (наиболее типичные для данного посева). Результаты внести в таблицу. Из этих колоний приготовить мазки, окрасить по Граму. Зарисовать.
Тесты
| Колония № 1
| Колония № 2
| Размер
|
|
| Форма
|
|
| Характер края
|
|
| Поверхность
|
|
| Цвет
|
|
| Структура
|
|
| Прозрачность
|
|
| Вязкость
|
|
| S 8rlW0IYw5lL6qkWr/dKNSOzVbrI68Dk10kz6zOV2kEkUZdLqjvhDq0d8aLH63B2tgpdVncRpv6+x f836r+aZtk/7rVJXi/l+DSLgHP7C8IvP6FAy08EdyXgxKEgznhIUJPEqBcGBJL1h5cBOcpuCLAv5 f0L5AwAA//8DAFBLAQItABQABgAIAAAAIQC2gziS/gAAAOEBAAATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAABb Q29udGVudF9UeXBlc10ueG1sUEsBAi0AFAAGAAgAAAAhADj9If/WAAAAlAEAAAsAAAAAAAAAAAAA AAAALwEAAF9yZWxzLy5yZWxzUEsBAi0AFAAGAAgAAAAhALoAkoE1AgAAUAQAAA4AAAAAAAAAAAAA AAAALgIAAGRycy9lMm9Eb2MueG1sUEsBAi0AFAAGAAgAAAAhAIV1HJ7fAAAACgEAAA8AAAAAAAAA AAAAAAAAjwQAAGRycy9kb3ducmV2LnhtbFBLBQYAAAAABAAEAPMAAACbBQAAAAA= "> Препарат № 1 Препарат № 2
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Б) среда Эндо
- изучить посевы на среде Эндо с целью выявления кишечной палочки (lac+ колонии). Из лактозопозитивных колоний сделать мазки, окрасить по Граму. Отметить наличие или отсутствие фекального загрязнения.
B z1LuOp0YM9cOW5YLDfb03FB52B2dhc/Z3ct6c9lucemSpzQ9fC/0HK29vRnXj6AijfFvGX71RR0K cdr7I1dBdRbkkSjTKSgJk4UR3gub5RR0kev/+sUPAAAA//8DAFBLAQItABQABgAIAAAAIQC2gziS /gAAAOEBAAATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAABbQ29udGVudF9UeXBlc10ueG1sUEsBAi0AFAAGAAgA AAAhADj9If/WAAAAlAEAAAsAAAAAAAAAAAAAAAAALwEAAF9yZWxzLy5yZWxzUEsBAi0AFAAGAAgA AAAhACVWpV9UAgAAagQAAA4AAAAAAAAAAAAAAAAALgIAAGRycy9lMm9Eb2MueG1sUEsBAi0AFAAG AAgAAAAhAMXpSV/bAAAABgEAAA8AAAAAAAAAAAAAAAAArgQAAGRycy9kb3ducmV2LnhtbFBLBQYA AAAABAAEAPMAAAC2BQAAAAA= ">
Резултат:_____________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:_______________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Работа № 2. Микрофлора ротовой полости
Цель:изучить микрофлору зубного налета.
Самостоятельная работа: приготовить препараты-мазки из зубного налета, окрасить по Граму и Бурри-Гинсу, оценить результат, сделать вывод.
Ход исследования:
а) стерильной палочкой взять материал из межзубного пространства;
б) приготовить препарат-мазок; окрасить по Граму (препарат № 1);
в) приготовить препарат-мазок, окрасить по Бурри-Гинсу (препарат № 2);
г) микроскопировать;
д) результаты внести в таблицу.
Препарат
| Окраска
| Морфология
| № 1
| По Граму
|
| № 2
| По Бурри-Гинсу
(капсула +, -)
|
|
Вывод:_______________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Работа № 3. Микрофлора желудочно-кишечного тракта
Цель:изучить микрофлору желудочно-кишечного тракта.
Самостоятельная работа:оценить по готовым посевам и препаратам-мазкам результат исследования кала на дисбактериоз. Зарисовать, описать. По результаты микробиологического исследования кала рекомендовать препараты - пробиотики для коррекции дисбактериоза. Сделать вывод.
Задача:В бактериологическую лабораторию доставили материал (кал) для исследования на дисбактериоз. Сделаны посевы на дифференциально-диагностические среды: Эндо, Калины, Блаурокка.
а)описать культуральные свойства колоний.
Среда Блаурокка (для бифидумбактерий)
Результат: _____________________________________________
____________________________________________
____________________________________________
Среда Эндо (ДДС для лак+ бактерий)
Результат: _____________________________________________
____________________________________________
____________________________________________
Среда Калины (для энтерококков)
Результат: ____________________________________________
____________________________________________
____________________________________________
Вывод:_______________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
б)по готовым мазкам, приготовленным из выросших колоний описать морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов. Окраска по Граму.
Результат: ______________________________________
_____________________________________
_____________________________________
Со среды Блаурокка
Результат: ____________________________________
____________________________________
____________________________________
Со среда Эндо
Результат: ____________________________________
____________________________________
____________________________________
Со среды Калины
Вывод:_______________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Результаты микробиологического исследования кала:
ГБОУ ВПО ТюмГМА, Многопрофильная клиника
Бактериологическая лаборатория
Микробиологическое исследование фекалий
на дисбактериоз
(ост 91500. 11. 0004-2003)
№ пробы_____________ первичный, повторный (подчеркнуть)
от «_____»_________________20_____г.
Ф.И.О. пациента____Петров П.П.________________________________
возраст___24 года_____________________________________________
Диагноз______________________________________________________
Откуда направлен______________________________________________
Микроорганизмы
| Количество микроорганизмов в 1 гр. фекалий
| норма
до 1 г
| Норма
от 1г до 60л
| норма
старше 60л
| у пациента
| Патогенные энтеробактерии
| нет
| нет
| нет
| | E. coli с нормальной ферментативной активностью
| 107 - 108
| 107 - 108
| 107 - 108
| 106
| E. coli лактозонегативные
| < 105
| < 105
| < 105
| | E. coli гемолитические
| нет
| нет
| нет
| 105
| Другие условно-патогенные энтеробактерии:
а)
б)
в)
| < 104
| < 104
| < 104
| < 104
| Неферментирующие бактерии
| ≤ 103
| ≤ 104
| ≤ 104
| | Энтерококки
| 105 - 107
| 105 - 108
| 106 - 107
| 105
| Стафилококк золотистый
| нет
| Нет
| нет
| | Стафилококки
(сапрофитный, эпидермальный) негемолизирующие
| ≤ 104
| ≤ 104
| ≤ 104
| ≤ 103
| Бифидобактерии
| 1010 -1011
| 109 - 1010
| 108 - 109
| 107
| Лактобактерии
| 106 - 107
| 107 - 108
| 106 - 107
| 106
| Лактострептококки
| 107 - 108
| 107 - 108
| 107 - 108
| 108
| Грибы
| ≤ 103
| ≤ 104
| ≤ 104
| ≤ 104
| Клостридии
| ≤ 103
| ≤ 105
| ≤ 106
| ≤ 105
| Прочие микроорганизмы
|
|
|
| | Заключение:
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
«____»_____________20____г. Врач _________________
Вывод:_______________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
в)объяснить назначение и механизм действия пробиотиков с учетом изменений качественного и количественного состава микрофлоры, классифицировать предложенные препараты. Результаты внести в таблицу:
Название пробиотика
| Классифика-ционное положение
| Действующее начало
| Получение
| Применение
| Способ применения
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
Работа № 4. Урогенитальная микрофлора
Цель: изучить состав урогенитальной микрофлоры.
Самостоятельная работа: по готовым препаратам-мазкам, окрашенным по Граму, оценить степень чистоты влагалищного секрета. Результаты внести в таблицу.
Критерии чистоты влагалища
| Степень чистоты влагалища
| I
| II
| III
| IV
| 1. палочка Додерлейна
2. кокки
3. Гр- палочки
4. грибы – кандида
5. микоплазмы
6. простейшие
7. клетки плоского эпителия
8. лейкоциты
|
|
|
|
| Вывод:_______________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Подпись преподавателя_______________________________________________________
Самостоятельная работа во внеурочное время
Дать определение понятиям:
1. Постоянная (облигатная) микрофлора - _____________________________________________________________________
2. Случайная (транзиторная) микрофлора -__________________________________________________________________
Микрофлора кожи
Облигатная: _______________________________________________________________________
Транзиторная: _____________________________________________________________________
Методы санитарно-биологического исследования кожи:
1____________________________________________________________________________
2____________________________________________________________________________
Микрофлора ротовой полости
Облигатная микрофлора ротовой полости: _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________
Транзиторная микрофлора ротовой полости: __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Роль слюны в поддержании постоянства микрофлоры _______________________________
_____________________________________________________________________________
Методы исследования микрофлоры ротовой полости
1.____________________________________________________________________________
2.____________________________________________________________________________
Микрофлора ЖКТ
Микрофлора желудка: __________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Микрофлора тонкого кишечника: _______________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Облигатная микрофлора толстого кишечника представлена: _________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Транзиторная микрофлора толстого кишечника представлена: _______________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Микрофлора уретры мужчин представлена: _______________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Микрофлора влагалища представлена: ___________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Пробиотики – это ______________________________________________________________
____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Подпись преподавателя_______________________________________________________
Теоретическая справка
Микрофлора тела человека по происхождению подразделяется на постоянную (синонимы: доминантная, облигатная, основная, резидентная, индигенная, аутохтонная) и случайную (синонимы: ассоциативная, факультативная, дополнительная, транзиторная, аллохтонная). Постоянная микрофлора содержит представителей, специфичных для данного биотопа, а ассоциативная включает микроорганизмы, попавшие извне.
Естественная микрофлора тела человека
| Основные биотопы тела человека
|
Виды м/о
| кожа
| ротовая полость
| дыхательная система
верхний отдел
| мочеполовая система нижний отдел
| ЖКТ
тонкий кишечник
| ЖКТ
толстый кишечник
| Стафилококк
| +
| +
| +
| + -
| | + -
| Микрококк
| +
| -
| -
| -
| -
| -
| Сарцины
| +
| -
| -
| -
| -
| -
| Дифтероиды
| +
| -
| -
| + -
| -
| -
| Стрептококки
| +
| +
| +
| + -
| +
| + -
| Бактероиды
| -
| +
| -
| + -
| -
| +
| Фузобактерии
| -
| +
| -
| -
| -
| -
| Вейлонеллы
| -
| +
| -
| -
| -
| +
| Актиномицеты
| -
| +
| -
| -
| -
| -
| Спирохеты
| -
| +
| -
| -
| -
| -
| Микоплазмы
| -
| +
| -
| + -
| -
| -
| Простейшие
| -
| +
| -
| -
| -
| -
| Диплококки
| -
| +
| + -
| -
| -
| -
| Энтеробактерии
| -
| -
| + -
| + -
| +
| +
| Грибы
| +
| +
| _
| + -
| + -
| +
| Палочка смегмы
| -
| -
| -
| +
| -
| -
| Палочка Додерлейна
| -
| -
| -
| +
| -
| -
| Лактобактерии
| -
| +
| -
| -
| +
| +
| Коринебактерии
| -
| +
| _
| + -
| -
| -
| Бациллы
| +
| -
| -
| -
| -
| +
| Клостридии
| -
| -
| -
| -
| -
| +
| Бифидумбак-терии
| -
| -
| -
| -
| -
| +
|
К работе № 1
1. Кожа, особенно ее открытые части, обсеменены различными микробами. Так, во время проведения санитарно-гигиенических процедур с кожи тела человека смывается от 85 до 120 млн. микроорганизмов. Микрофлора кожи складывается не только из микробов, находящихся на поверхности, но и в глубине кожи (волосяные мешочки, протоки сальных и потовых желез).
На грязной коже многие микробы способны не только сохранять жизнеспособность, но и размножаться. На поверхности чистой кожи микроорганизмы быстро гибнут.
Питание микробов кожи обеспечивается отмершими клетками эпителия, а также выделениями потовых и сальных желез. Через неповрежденные кожные покровы большинство микроорганизмов, в том числе и патогенные не проникают. При нарушении же целостности кожных покров, а также при снижении общей резистентности микроорганизмов на коже могут возникать различные заболевания: гнойничковые элементы, инфицированные мацерации, вызванные бактериями, грибками, вирусами.
Микрофлору кожи составляют микроорганизмы как постоянно живущие на ней, так и разнообразная заносная микрофлора, попадающая из внешней среды - из воды, воздуха, почвы, при соприкосновении с грязными объектами внешней среды или полостями организма (рот, кишечник, полость носа и др.).
На поверхности кожи обнаруживаются кокки (стафилококки, стрептококки), чаще непатогенные (сарцины, дифтероиды, бациллы, дрожжевые и дрожжеподобные грибы).
Наиболее часто (80-90%) на коже определяется эпидермальный стафилококк –Staphylococcus epidermidis, - золотистый и лимонно-желтый стафилококк.
Санитарно-бактериологическое исследование кожи проводится двумя методами:
1) посев отпечатков кожи пальцев на чашки с МПА или на специальные среды (например, кровяной агар) с последующим макроскопическим и микроскопическим изучением выросших колоний;
2) смывы с рук, для проведения которых используют увлажненный ватный тампон, которым протирают руки обследуемого, начиная с менее загрязненных участков кожи: тыльную часть ладони, ладонь, межпальцевые поверхности, ногтевые ложа и подногтевые поверхности. Тампон погружают в стерильный физиологический раствор (8-10 мл), жидкость тщательно встряхивают и исследуют на ОМЧ и на наличие кишечной палочки.
Определение общего микробного числа - ОМЧ.
Методика.1 мл смыва вносят в стерильную чашку Петри, затем заливают ее 12 - 15 мл расплавленного и остуженного до 45°С МПА, перемешивают, после застывания агара посев инкубируют 24 - 48 часов, при температуре 37°С. Производят подсчет выросших колоний на поверхности чашки и в глубине агара при помощи лупы.
Определение кишечной палочки.
Методика.Оставшееся количество смыва помещают в пробирку с 5 мл среды Кесслера и инкубируют в термостате при температуре 43°С. На следующие сутки высеивают на среду Эндо. В случае появления типичных для кишечной палочки колоний производят идентификацию кишечной палочки и делают вывод о фекальном загрязнении кожи.
Среда Кесслера содержит желчь, генциан фиолетовый, пептон, лактозу. E.coli ферментирует лактозу с образованием газа, скапливающегося в поплавке.
К работе № 2
2. Микрофлора ротовой полости и верхних дыхательных путейразнообразна и многочисленна, здесь обнаруживается более 100 видов микроорганизмов. Особенно много их локализуется в зубном налете - в 1 г сухой массы содержится около 250 млн. микробных клеток.
В ротовой полости создаются благоприятные условия для жизнедеятельности микроорганизмов - это щелочная реакция слюны, пищевые остатки, термостатная температура и влажность. В различных участках полости рта микрофлора не одинакова. На боковых поверхностях рта микробов мало. Поверхность языка, особенно задней его части, а также задней части носоглотки содержит большое количество микроорганизмов. Здесь преобладают стрептококки, сарцины, спирохеты, веретенообразные палочки, стафилококки и др. Большое разнообразие микрофлоры наблюдается между зубами, в криптах и лакунах миндалин, где из остатков эпителия, детрита и бактерий образуются тонзиллярные пробки, однако преобладают стрептококки и диплококки. Резидентную группу составляют стрептококки (Str. salivarius и др.), непатогенные стафилококки, диплококки, коринебактерии, лактобациллы, вейлонеллы, трепонемы (Тг. buccalis - наиболее распространённый вид), дрожжеподобные грибы (Candida albicans), актиномицеты, микоплазмы, простейшие.
Среди факультативных микроорганизмов встречаются энтеробактерии (роды Escherichia, Klebsiella, энтеробактерии протея), синегнойная палочка, спорообразующие - бациллы, клостридии, а также пептострептококки и пептококки. Некоторое время в ротовой полости могут персистировать вибрионы, спирохеты, дифтерийная палочка, менингококки и др.
В поддержании количественного и качественного постоянства нормальной микрофлоры полости рта главную роль играет слюна, обладающая антибактериальной активностью за счёт содержания в ней ферментов (лизоцим, лактоферрин, пероксидаза, нуклеаза) и секреторных иммуноглобулинов. Индивидуальные колебания в составе микрофлоры полости рта зависят от возраста, гигиенических навыков, диеты, общей резистентности организма и резистентности слизистых оболочек, наличие дефектов зубов.
Нормальная микрофлора полости рта обеспечивает её защиту за счёт конкуренции, антагонизма по отношению к патогенным микроорганизмам, таким как дифтерийный возбудитель, патогенные стафилококки и стрептококки, менингококки, условно-патогенные и патогенные грибы. В случае же нарушения микрофлоры, то есть возникновение дисбактериоза, патогенные и условно-патогенные микробы могут вызывать заболевания органов полости рта или обеспечивать так называемую нисходящую инфекцию, т.е. миграцию микроорганизмов из полости рта в глотку, гортань, желудок, трахею, бронхи, лёгкие.
Для изучения микрофлоры ротовой полости применяют следующие методы:
а) бактериологический – посев биоматериала на питательные среды с последующей идентификацией микроорганизмов;
б) бактериоскопический (вспомогательный метод диагностики) - готовят препараты-мазки, красят по Граму, по Леффлеру и Нейссеру, Циль-Нильсену, Бурри-Гинсу, микроскопируют. Определяют морфологические и тинкториальные свойства возбудителей.
К работе № 3
3. Микрофлора ЖКТ.
Микрофлора желудка немногочисленна, здесь встречаются сарцины, кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии, дрожжевые грибы.
Микрофлора тонкого кишечника также немногочисленна (благодаря действию ферментов), в этом биотопе обнаруживаются лактобактерии, дрожжевые и дрожжеподобные грибы.
Микрофлора толстого кишечника: в толстом кишечнике находится самая разнообразная по составу микрофлора.
Биомасса микроорганизмов, заселяющих кишечник взрослого человека, составляет 2,5-3 кг и включает в себя до 450 видов.
Нормальная микрофлора кишечника на 92-95% состоит из строго анаэробных видов, остальная часть - аэробы.
Микробиологическое исследование фекалий производится с целью определения состояния нормальной микрофлоры или для исключения дисбактериоза кишечника, показания для него разнообразны - предоперационное обследование больных, кишечные инфекции неясной этиологии, дисфункции кишечника после антибиотикотерапии, уточнение диагноза и др.
Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.
Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа.
Исследуемые фекалии помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробный, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратное разведение надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высеивают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов. Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 37°С.
Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, проводят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа.
Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника.
Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 12 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев.
Количество обнаруженных микроорганизмов выражают в десятичных логарифмах.
Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о состоянии микрофлоры кишечника.
Характеристика представителей нормальной микрофлоры кишечника человека:
1. Бифидобактерии (род Bifidobacterium).
Строгие анаэробы. Занимают доминирующее положение в облигатной микрофлоре кишечника здорового человека, обладают высокой антагонистической активностью. Своё название получили из-за характерного разветвления на конце палочек - бифиркаций. Культивирование проводится на специальной питательной среде Блаурокка, в пробирках в анаэробных условиях.
Среда Блаурокка готовится следующим образом - к печёночному отвару добавляют пептон, поваренную соль, мясопептонный агар, лактозу, солянокислый цистеин, среду стерилизуют и регенерируют кипячением в течение 40-45 минут.
Культуральные свойства бифидобактерий. На среде Блаурокка, в толще среды, бифидобактерии дают характерный придонный рост - в виде "точек с хвостиками" или маленьких комочков.
Морфологические свойства бифидобактерий. В мазке регистрируются характерные Гр+ палочки с разветвлёнными или утолщёнными концами, расположенные в виде римских пятёрок или скоплений, напоминающих китайские иероглифы.
2. Кишечные палочки(Escherichia coli).
Факультативные анаэробы. Прямые Гр- палочки с закругленными концами.
ДДС - среда Эндо (питательный агар, 1% лактоза и индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледно-розовую окраску. При росте кишечной палочки (лактозоположительные бактерии) колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; лактозоотрицательные бактерии образуют бледно-розовые колонии.
3. Энтерококки (род Enterococcus).
Аэробы. В настоящее время определяют 2 вида энтерококков - 1) Ent. fecalis и 2) Ent. faecium. Культивирование энтерококков проводится на среде Калины.
Среда Калины - это ДДС для энтерококков, готовится на основе 1,5% ПМА, содержит глюкозу, дрожжевой гидролизат, молоко, полимиксин, краску кристаллический фиолетовый (водный раствор).
На этой среде 2 вида энтерококков различаются по культурным свойствам - первый вид даёт колонии мелкие или средних размеров яркие, красно-вишнёвые, второй вид - розовые, розовато-серые колонии.
Морфологические свойства энтерококков - в мазке видны короткие цепочки Гр+ кокков, иногда вытянутой формы или единичные кокки.
К работе № 4
4. Микрофлора урогенитальной системы.Почки, мочеточники и моча в мочевом пузыре в норме стерильны. На наружных половых органах мужчин и женщин обнаруживаются микобактерии смегмы (Myсobaсterium smegmatis) непатогенные, иногда патогенные стафилококки, монококки, коринебактерии, микоплазмы, но пейзаж микроорганизмов однообразен, включает 2-3-4 вида. Уретра женщин обычно стерильна. Уретра мужчин имеет микрофлору немногочисленную - непатогенные кокки, сапрофиты, дрожжи. Микрофлора влагалища разнообразна, но не постоянна, зависит от многих причин, в том числе и от функции яичников, от возраста и общей резистентности организма, а также от уровня гликогена в клетках эпителия влагалища и рН влагалищного секрета. Сразу после рождения женщины происходит заселение влагалища лактобактериями, затем появляется кокковая флора. В зрелом возрасте, кроме лактобактерий и непатогенных кокков, появляются непатогенные стрептококки, клебсиеллы, бактероиды, анаэробы, микоплазмы, дрожжевые грибки, грибы Candida. Но основным и важнейшим представителем нормальной микрофлоры влагалища является Lас. vaginalis (палочки Додерлейна), влагалищные палочки. Влагалищные палочки имеют двоякую форму - одни из них крупные, грамположительные, с резко обрубленными концами, другие - тонкие, изящные, с заострёнными концами, располагаются поодиночке или попарно. Микроорганизмы неподвижны, спор не образуют, капсул не имеют, факультативные анаэробы. Наилучшей средой для культивирования является печёночный бульон с добавлением 2% виноградного сахара и кусочков печени или сахарный бульон, образуют S- и R- формы колоний. Обладают довольно выраженной биохимической активностью.
В некоторых случаях, в микрофлоре влагалища появляются и вызывают заболевания такие микробы как патогенные или условно-патогенные стафилококки, стрептококки, синегнойные палочки, клебсиеллы, хламидии, а также микробные ассоциации.
Хламидии, вызывающие распространённое в настоящее время хламидиоз, не являются представителем нормальной микрофлоры влагалища. Обнаружение хламидий в соскобе или мазке всегда говорит о патологическом процессе, даже в том случае, если у женщины нет клиники - в этом случае имеет место персистенция - до начала появления клинической болезни.
Поражения органов урогенитального тракта, вызванные микоплазмами, хламидиями, клебсиеллами, сложны как в диагностике, так и в лечении. Трудности в диагностике вызваны особенностями строения и культивирования микроорганизмов - так, микоплазмы и хламидии размножаются внутриклеточно, а клебсиеллы имеют капсулу и требуют особых методов окраски.
Микробиологическое изучение микрофлоры влагалища включает 2 метода исследования - микроскопическое и микробиологическое, с выделением чистой культуры возбудителей.
Микроскопическое исследование состоит в определении степени чистоты влагалищного секрета (схема Гейрлина) в препарате-мазке или соскобе, взятым стерильным тампоном или специальным инструментом.
Различают 4 степени чистоты влагалищного секрета при окраске по Граму:
• при первой степени - обнаруживаются влагалищные палочки в чистой культуре и скудное количество клеток плоского эпителия;
• при второй степени чистоты - кроме влагалищной палочки в мазке определяется небольшое количество посторонних бактерий (кокков и других непатогенных микроорганизмов) и клеток плоского эпителия;
• третья степень чистоты характеризуется очень незначительным содержанием влагалищных палочек, значительным количеством кокковых форм, бактерий и обилием лейкоцитов;
• при четвёртой степени частоты - влагалищные палочки совершенно отсутствуют, большое количество разнообразных кокков, палочковидные бактерии, грибы, микоплазмы, клебсиеллы, и др. Лейкоциты находятся в большом количестве.
Микрофлору третьей и четвёртой степени чистоты следует рассматривать как дисбактериоз влагалища, но у женщин в климактерическом периоде или в пожилом возрасте она является распространённым явлением и не всегда рассматривается как патология.
Во влагалищном содержимом при патологии могут быть обнаружены патогенные или условно-патогенные микроорганизмы - гонококки, стафилококки, хламидии, а также простейшие.
Наиболее распространённым возбудителем из простейших является вагинальная трихомонада - Tr. vaginalis - жгутиковое простейшее длинной 5-30 мкм, имеет 3-5 жгутиков, вызывающая трихомонадный кольпит.
Для обнаружения этого возбудителя вагинальный секрет берут ватным тампоном или вагинальной ложечкой, помещают на подогретое предметное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Вагинальная трихомонада обнаруживается и в окрашенных мазках - по Граму, по Романовскому-Гимза.
Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту:
©2015 - 2024 stydopedia.ru Все материалы защищены законодательством РФ.
|