ТЕМА: ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ. МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Наследственность. Организация генетического аппарата у бактерий (нуклеоид, плазмиды, IS-последовательности, транспозоны).
2. Принципы функционирования бактериального генома. Организация оперона. Генотип и фенотип.
3. Плазмиды, классификация, структура и свойства плазмид. R-плазмида, особенности структуры и функции. Плазмиды бактериоциногении.
4. Изменчивость микробов. Модификации у бактерий, значение, основные проявления и свойства (ненаследственный характер, адаптивность, высокая частота прямых и обратных изменений, множество индуцирующих факторов).
5. Генотипическая изменчивость. Мутации и их классификация. Мутагены. Фенотипические проявления мутаций. Судьба мутантов. Диссоциация у бактерий. Влияние отбора. Система репарации повреждений генома.
6. Рекомбинационная изменчивость. Механизмы образования комбинированных геномов. Частота изменений отдельных признаков. Трансформация, трансдукция, конъюгация.
7. Практическое значение знаний о генетике микробов. Принципы генетического картирования.
8. Методы генетического анализа (молекулярная гибридизация, полимеразная цепная реакция ПЦР, секвенирование).
9. Понятие о генной инженерии и использование ее методов в микробиологии и биотехнологии. Получение и применение генно-инженерных вакцин и цитокинов.
ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА
1► Исследование H- и О- модификаций Proteus vulgaris на МПА с фенолом и без него.
Модификационная изменчивость культуральных свойств штамма Proteus vulgaris.
Чашки с МПА (одна с фенолом, другая без фенола) засеваются штриховым методом культурой Proteus vulgaris. Учет результатов проводится через сутки после посева.
МПА без фенола МПА с фенолом
Н-форма О-форма
Вывод: ______________________________________________________________________________________
2►Изучение и описание S- и R- форм колоний энтеробактерий на пластинчатом МПА.
Сравните культуральные свойства энтеробактерий в S- и R- форме:
S-колония ___________________________________________________________________________________
R- колония ___________________________________________________________________________________
3► Выявление ауксотрофных мутантов методом отпечатков (реплик).
Взвесь бактерий обрабатывают мутагеном (УФО) и разведения засевают на чашки с МПА. После инкубации выросшие колонии переносят с помощью репликатора на чашки с МПА и минимальным агаром. После инкубации в термостате производят сравнение роста колоний на обычном и минимальном агаре. Отсутствие роста колоний на минимальном агаре соответствует расположению колоний ауксотрофных мутантов на полноценном МПА. На рисунке обведите красным карандашом колонии ауксотрофных мутантов.
МПА Минимальный агар
Вывод: ______________________________________________________________________________________
4►Изучение роста лактозоположительных и лактозоотрицательных колоний E.coli на среде Эндо.
Укажите формы изменчивости ___________________________________________________________________
5►Учет опытов по трансформации, трансдукции, конъюгации.
Трансформация______________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Опыт по трансформации:
Материал исследования
| Донор (указать генотип) ______________________________________________
Реципиент (указать генотип) __________________________________________
Среда без триптофана
| Ход исследования
| Приготовить смыв реципиентной культуры. Смыв внести в две пробирки. В пробирку №1 добавить физраствор (контроль). В пробирку №2 внести ДНК, выделенную из культуры донора. Инкубация в термостате. Пересев из обеих пробирок на среду без триптофана.
| Учет опыта
|
Рекомбинат (указать генотип) _________________________________________
|
Трансдукция _________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Опыт по трансдукции:
Материал исследования
| Донор (указать генотип) ______________________________________________
___________________________________________________________________
Реципиент (указать генотип) __________________________________________
Среда Эндо
| Ход исследования
| Приготовить смыв реципиентной культуры (E.coli). Смыв внести в две пробирки. В пробирку №1 добавить физраствор (контроль). В пробирку №2 внести фаголизат из культуры донора. Инкубация в термостате. Пересев из обеих пробирок на среду Эндо.
| Учет опыта (сделать рисунок)
|
Рекомбинат (указать генотип) _________________________________________
|
Конъюгация__________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Опыт по конъюгации:
Материал исследования
| Донор (указать генотип) ______________________________________________
Реципиент (указать генотип) __________________________________________
Среда без триптофана и лейцина
| Ход исследования
| Приготовить смыв реципиентной культуры. Смыв внести в две пробирки. В пробирку №1 добавить физраствор (контроль). В пробирку №2 внести смыв культуры донора. Инкубация в термостате. Пересев из обеих пробирок на среду без триптофана и лейцина
| Учет опыта
| Рекомбинат (указать генотип) _________________________________________
|
6► Определение бактериоциногенности культур микроорганизмов.
Бактериоцины _________________________________________________________________________________
Бактериоциногенность __________________________________________________________________________
Бактериоциногенотипирование ___________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Бактериоцинотипирование ______________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Принцип метода для определения бактериоциногенности: исследуемые культуры бактерий засевают уколом в чашку с МПА. Выросшие культуры убивают парами хлороформа. После испарения хлороформа поверхность агара заливается расплавленным и остуженным 0,7% МПА, смешанным с индикаторной культурой.
Учет результатов проводится через сутки после посева по зонам подавления роста индикаторной культуры вокруг колоний, обладающих бактериоциногенностью.
Вывод:_______________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту:
©2015 - 2024 stydopedia.ru Все материалы защищены законодательством РФ.
|