II. Ознакомьтесь с тест-системой ИФА для диагностики ВИЧ-инфекции.

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Кафедра микробиологии

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ДЛЯ ОБУЧАЮЩИХСЯ К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ № 35

для студентов специальности «фармация»

Тема: «Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции»

Утверждена на кафедральном заседании

№ протокола __105__

«__16_»__февраля__ 2007 г.

Зав. кафедрой микробиологии

ГОУ ВПО КрасГМА Росздрава

к.б.н., доцент Перьянова О.В. _____________

Составители:

к.б.н., доцент Перьянова О.В. _____________

к.б.н., ст. преподаватель

кафедры Хохлова О.Е. ______________

Ст. преподаватель

кафедры Степанова А.И. ______________

Красноярск

1. Тема № 37:Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции.

2. Значение изучения темы: ВИЧ-инфекция это привлекает к себе внимание как тяжелое заболевание человека, имеющее пандемическое распространение. Динамика распространения ВИЧ показывает, что медицинские и социально-нравственные проблемы связаны в единый узел. Если учесть, что вирусоносители – это активные источники инфекции, а также то обстоятельство, что основными путями передачи является внутривенное введение наркотиков, половой, гематрансфузии и вертикальный, становится понятным значение проблемы ВИЧ-инфекции в целом. Поводом для оптимизма является то, что в настоящее время проблемой ВИЧ занимаются многие лаборатории мира. ВОЗ рассматривает эту проблему, как первоочередную в своей деятельности. В России проблема ВИЧ-инфекции является составляющей национальной программы «Здоровье».

3. Цели занятия: на основе теоретических знаний и практических умений обучающийся должен:

знать

а) Классификацию, морфобиологические особенности ВИЧ.

б) Источники инфекции, особенности патогенеза и иммунитета при ВИЧ-инфекции.

в) Материалы и методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции.

г) Профилактику и терапию ВИЧ-инфекции.

уметь

а) Учитывать и оценивать результаты ИФА на ВИЧ-инфекцию.

б) Учитывать и оценивать результаты иммунного блотинга на ВИЧ-инфекцию.

иметь представление о биологии вируса иммунодефицита человека, особенностей его взаимодействия с макроорганизмом и уметь обосновать тактику лабораторной диагностики, профилактику ВИЧ-инфекции;

иметь навыки по микробиологической диагностики, профилактике и терапии заболевания вызываемого вирусом иммунодефицита человека.

4. План изучения темы:

4.1.Самостоятельная работа:

· Выполнение практических заданий – 45 мин.

· Заполнение протокола – 15 мин.

4.2. Исходный уровень знаний:

Собеседование по контрольным вопросам:

· Классификация вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).

· Морфология, антигенное строение, культивирование, резистентность ВИЧ.

· Источники инфекции, пути передачи, особенности патогенеза и иммунитета при ВИЧ-инфекции.

· Материалы и методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции.

· Состояние проблемы профилактики и терапии ВИЧ-инфекции.

Тесты.

1) Первооткрыватели ВИЧ:

а) Мюллис Кэри Б. (1983)

б) Р.Галло, Л. Монтанье (1983)

г) М. Ризетто (1977)

д) М.С.Балаян (1983)

2) ВИЧ (верно все, кроме):

а) РНК-содержащий

б) ДНК-содержащий

в) средний

г) сложный

д) смешанный тип симметрии

3) Антигены ВИЧ все, кроме:

а) p17

б) p24

в) CD4⁺

г) gp120

д) 41

4) Особенности патогенеза при ВИЧ-инфекции (верно все, к р о м е):

а) длительная персистенция вируса

б) онкогенная трансформация клеток

в) прогрессирующее уменьшение количества СД4⁺-клеток

г) глубокий вторичный иммунодефицит

д) развитие оппортунистических инфекций

5) Пути передачи при ВИЧ-инфекции (верно все, к р о м е):

а) половой

б) во время беременности

в) при грудном вскармливании

г) при внутривенном введении наркотиков

д) при пользовании общей посудой

6) От инфицированной матери к ребенку ВИЧ передается (верно все, к р о м е):

а) в период внутриутробного развития

б) во время родов

в) при кормлении грудью

г) через руки

д) при переливании крови

7) Рецептор клеток-мишеней для ВИЧ:

а) СД 22

б) СД 19

в) СД 8

г) СД 4

д) СД 3

8) Первичное проявление ВИЧ-инфекции:

а) пневмоцистная пневмония

б) генерализованная цитомегаловирусная инфекция

в) атипичный микобактериоз

г) лимфоаденопатия

д) грипп

9) Основой лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции является:

а) выделение вируса in vitro

б) определение антител

в) определение РНК вируса

г) определение ГЧЗТ

д) определение антигенов вируса

Какой лабораторный тест наиболее достоверно подтверждает диагноз ВИЧ-инфекция?

а) клинический анализ крови

б) ИФА

в) соотношение Т-хелперов и Т-супрессоров

г) иммунноблотинг

11) СПИД-индикаторные болезни все, к р о м е:

а) пневмоцистной пневмонии

б) гистоплазмоза

в) кокцидомикоза

г) токсоплазмоза

д) гепатита В

12) Группами риска при ВИЧ-инфекции являются все, к р о м е:

а) медицинских работников ЛПУ (врачей отделений гемодиализа, хирургов и др.)

б) наркоманов, использующих наркотики внутривенно

в) лиц, занимающихся коммерческим сексом

г) реципиентов крови и ее компонентов

д) доноров крови

13) Направления терапии ВИЧ-инфекции:

а) противовирусная

б) патогенетическая

в) симптоматическая

г) комбинированная

д) все вышеперечисленные

14) Профилактика профессионального заражения ВИЧ-инфекцией медицинского персонала ЛПУ включает все, к р о м е:

а) работы в спецодежде

б) использования индивидуальных средств защиты (перчатки, щитки, маски и др.)

в) при работе с пациентами не касаться руками своих глаз, носа, рта

г) осторожности при работе с острыми инструментами

д) вакцинации

15) Профилактика ВИЧ-инфекции (верно все, к р о м е):

а) вакцинация групп риска

б) выявление вирусоносителей и больных

в) борьба с наркоманией

г) контроль препаратов крови

д) санитарно-просветительная работа

Составитель тестов:

зав. кафедрой Перьянова О.В.

4.3.Самостоятельная работа по теме:

1. Провести диагностику ВИЧ-инфекции:

1.1. Учесть и оценить результаты ИФА на ВИЧ-инфекцию с сыворотками обследуемых.

Наметить план дальнейшего обследования.

1.2. Учесть и оценить результаты метода иммунного блотинга с сыворотками обследуемых, давших положительный результат в ИФА.

2. Ознакомиться с тест-системой ИФА для диагностики ВИЧ-инфекции.

4.4.Итоговый контроль знаний:

- Подведение итогов.

Основные понятия и положения темы.

ИФА применяется для скрининга донорской крови и в диагностических целях для выявления противовирусных антител к ВИЧ. Для верификации положительных результатов ИФА используют метод иммунного блотинга, принцип которого заключается в выявлении антител к определенным белкам вируса.

6. Задания для уяснения темы занятия, методики вида деятельности:

6.1. Вопросы для самоконтроля:

а) Современная эпидемиологическая обстановка по ВИЧ-инфекции в Красноярском крае.

б) Назовите клетки-мишени для ВИЧ в организме человека.

в) Объясните сущность механизма формирования вторичного иммунодефицита при ВИЧ-инфекции.

г) Назовите основной метод лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции и серологические реакции, использующиеся для скринингового, референтного и арбитражного исследования.

д) Назовите индикаторные заболевания СПИДа и отличительные биологические особенности вызывающих их возбудителей.

е) Назовите возможные пути заражения ВИЧ-инфекцией и соответствующие группы риска.

ж) Назовите основные меры профилактики ВИЧ-инфекции на современном этапе.

6.2. Решение ситуационных задач:

а) Спортсмен Олег К, 25 л, обратился с жалобами на слабость, недомогание, потливость, повышение температуры тела до 38-39,5^оС, частый жидкий стул, потерю веса на 7 кг. Появилась крупнопянистая сыпь на теле, увеличились в размере паховые и подчелюстные лимфоузлы При расспросе больного выяснилось, что ранее ничем ни болел. 3,5 месяца назад вернулся из служебной командировки, где получил открытую травму. 12 дней находился в больнице, где ему переливали кровь. Оценивая анамнез и клиническую картину заболевания, врач заподозрил у больного ВИЧ-инфекцию.

1. Каким образом можно подтвердить или опровергнуть предварительный диагноз?

2. Какие исследования должны быть проведены для диагностики ВИЧ-инфекции?

3. Какие результаты проведенных исследований дадут основание утверждать, что у больного ВИЧ-инфекция?

4. Как мог заразится Олег К? Он не гомосексуалист, не наркоман. Какие либо интимные связи вне семьи отвергает.

б) В детских отделениях многопрофильной больницы, госпитализировано 500 больных детей. Среди них обнаружен 1 больной и 10 носителей ВИЧ. Установлено, что ВИЧ передавался через плохо стерилизуемый медицинский инструментарий.

1. Можно ли прервать распространение ВИЧ-инфекции среди больных детей?

2. Укажите эффективное средство санации носителей ВИЧ?

3. Родители остальных 489 детей, одновременно лечившихся с больными ВИЧ и вирусоносителями, потребовали от администрации и врачей больницы вакцинировать их детей и тем самым защитить от возможного заболевания.

4. Как Вы поступите в таком случае в роли главного врача этой больницы?

в) На семинаре по ВИЧ-инфекции, проводимом Вами с медицинскими работниками среднего звена, медицинская сестра без стажа работы попросила ответить на следующие вопросы:

1. Возбудитель ВИЧ-инфекции обладает онкогенными свойствами?

2. Какие же патогенетические механизмы приводят к развитию онкологических заболеваний?

3. Какое онкогенное заболевание развивается чаще всего при ВИЧ-инфекции?

6.3. Методические указания к выполнению исследовательского задания:

I. Проведите диагностику ВИЧ-инфекции, для чего:

1.1. Учтите и оцените результаты ИФА на ВИЧ-инфекцию с сыворотками обследуемых:

- А, В, С – наркоманы, использующие внутривенное введение наркотиков;

- D – лицо, занимающееся коммерческим сексом;

- Е – провизор, проходящий мед. осмотр;

- F – супруга наркомана, использующего внутривенное введение наркотиков;

- G, Н – контроли (К+, К-).

Наметьте план дальнейшего обследования.

В основе ИФА, используемого для серодиагностики ВИЧ-инфекции, лежит способность анти-ВИЧ взаимодействовать с вирусным антигеном, предварительно адсорбированным в лунках полистироловой панели. При этом образуется комплекс антиген-антитело, который на следующем этапе выявляется добавлением антивидовой противочеловеческой сыворотки, меченной пероксидазой. Образование желто-коричневого продукта при последующем добавлении субстрата (ортофенилендиамина-ОФД) свидетельствует о положительной реакции.

Контроли: ИФА с сывороткой, заведомо содержащей анти-ВИЧ (К+) и с сывороткой, заведомо не содержащей анти-ВИЧ (К-).

В случае положительного результата ИФА обязательным является повторное проведение ИФА с другой тест-системой.

1.2. Учтите и оцените результаты метода иммуного блотинга с сыворотками обследуемых, давших положительный результат в ИФА.

В иммунном блотинге белки вируса иммунодефицита человека с помощью электрофореза разделяют по молекулярной массе и переносят на нитроцеллюлозную полоску, которую обрабатывают сывороткой обследуемого. Образующиеся иммунные комплексы выявляют с помощью ИФА. Специфичность полос на иммуноблоте оценивается в соответствии с результатами исследования контрольной положительной сыворотки, которое проводится параллельно с исследованием опытных проб.

По рекомендациям Российского научно-методического центра по профилактике и борьбе со СПИДом положительным считается результат при наличии антител к двум из белков gp41, gp120, gp160 (геном ENV) при наличии или отсутствии антител к другим специфическим белкам ВИЧ: р24, р40, р55; р17 (геном GAG); р32, р51, р66 (геном POL).

Положительный результат иммунного блотинга при наличии соответствующих эпидемиологических и клинических данных свидетельствует о ВИЧ-инфекции. Сообщить пациенту диагноз имеет право только лечащий врач, желательно в присутствии психотерапевта.

На основании полученных результатов сделайте вывод.

II. Ознакомьтесь с тест-системой ИФА для диагностики ВИЧ-инфекции.

7. Список тем по УИРС, предлагаемый кафедрой:

· Эпидемиологическая обстановка по ВИЧ инфекции в Красноярском крае.

· Основные меры профилактики ВИЧ-инфекции на современном этапе.

· Современное состояние проблемы создания вакцин для специфической профилактики ВИЧ-инфекции.

8. Рекомендуемая литература:

• Основная

1. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник / Под ред. А.А. Воробьева. – М.: ООО «МИА», 2006. – С. 577-581.

· Дополнительная

1. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: Учебное пособие для студентов медицинских вузов / Под ред. А.А. Воробьева, А.С. Быкова – М.: МИА, 2003. – С. 64.

2. Поздеев О. К. Медицинская микробиология / Под ред. В.И. Покровского. – 2-е изд., испр. М.: ГЭОТАР-Медицина, 2004. – С. 489-492.

3. Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник. – М.: ООО «МИА», 2005. – С. 497-513.

4. Лекции по микробиологии.

• Учебно-методические пособия

1. Перьянова, О.В. Общая и частная микробиология (тестовые задания для студентов специальности 060108 – фармация) / О.В. Перьянова, А.И.Степанова, О.Е.Хохлова. – Красноярск: типография КрасГМА, 2008.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: