Методика определения группы крови и резус-фактора

Определение групп крови.

Суть метода сводится к обнаружению в исследуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этого используется реакция агглютинации. Постановку реакции проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25 "С.

Необходимое оснащение:

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II).

В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотки для опре­деления групп крови изготавливают в специальных серологических лабораториях из донорской кропи. Сыворотки хранят при темпера­туре 4-8°С (в холодильнике). Срок годности сыворотки указан на этикете. Титр сыворотки (также указывается на этикетке) должен быть не ниже 1:32 (для сыворотки В (III) — не ниже 1:16/32). ( Под титром сыворотки понимается то максимальное ее разведение, при котором может наступать реакция агглютинации. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различных групп подкрашивают в определенный цвет: О (I) — бесцветная (серая), А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — ярко-желтая; Следует отметить, что указанные цвета сопутствуют всем этикеткам на препаратах крови, имеющих групповую принадлежность (кровь эритроцитная масса, плазма и др.).

Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или любые другие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные О (I), А(II), В(III), АВ(IV).

Изотопический раствор хлорида натрия.

Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).

Методика проведения реакции

1. Перед началом реакции подписывают тарелку (наносят фамилию и инициалы исследуемого). После чего на нее под соответствующие обозначения наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II и III групп в объеме 0,1 мл (капля около 1 см в диаметре). Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Всего получается б капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: О (I), А (II), В(III).
2. Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку (0,01 мл, маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закругленными краями перемешивают. Возможна более простая методика: на тарелку наносят одну большую каплю крови, из которой ее забирают уголком предметного стекла и переносят в каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая с последней. При этом всякий раз кровь берут новым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не сливались.
3. После смешивания тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 с, однако наблюдение следует обязательно вести до 5 мин ввиду возможности более поздней агглютинации, например, с эритроцитами группы А2(II).
4. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.

Трактовка результатов

Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной.

При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 с в смеси появляются видимые невооруженным взглядом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зернышки постепенно сливаются в более крупные зерна, а иногда в хлопья непра­вильной формы. При этом сыворотка частично или полностью обесцвечи­вается. Положительная реакция может быть пескообразной или лепестко­вой.

При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашен­ной в красный цвет и в ней не обна­руживается никаких зернышек (агглютинатов).

Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать.

Принадлежность исследуемой кро­ви к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после на­блюдения в течение 5 мин.

При этом следует отметить, что, если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена — А и В и принадлежит к группе АВ(IV). Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследова­ние испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующеи сыворот­кой группы АВ(IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ0 (IV).

Способы определения резус-фактора.

В клинических условиях (в приемном покое, в хирургическом отделе­нии, в операционной), где нет специального лабораторного оборудования, используются экспресс-методы определения Rh-фактора.

1. Экспресс-метод стандартным универсальным реагентом в пробирке без

подогрева.

2. Экспресс-метод на плоскости без подогрева.

Экспресс-метод определения Rh -фактора стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева

Для исследования может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца (из вены) непосредственно перед исследованием, или консервированная кровь без предварительной обработки, а также эрит­роциты из пробирки после формирования сгустка и отстаивания сыворот­ки.

Методика проведения реакции. Исследование проводят в цент­рифужных пробирках объемом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего со­бой антирезусную сыворотку группы АВ (IV), содержащую 33 % раствор полиглюкина. Затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по ее внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает ее крупно лепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает, как правило, в течение первой минуты, но для образования устойчивого комп­лекса «антиген— антитело» и четкой агглютинации наблюдать следует не менее 3 мин. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроци­тов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемеши­вают путем одно-двукратного перевертывания пробирки (без взбалтыва­ния!).

Трактовка результатов. Наличие агглютинации (крупные хло­пья на фоне просветленной жидкости) указывает на резус-положитель­ную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная розовая жидкость) свидетельствует о ре­зус-отрицательной принадлежности исследуемой крови.

Экспресс-метод определения Rh -фактора на плоскости без подогрева

Методика проведения реакции. На белой пластинке со смачивае­мой поверхностью пишут фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется. На левом краю пластинки делают надпись «сыворотка — антирезус», на правом —«контрольная сыворотка». Последней служит разведенная альбумином сыворотка группы АВ (IV), не содержащая анти­тел антирезус. Соответственно надписям на пластинке помещают по капле (0,1 мл) реактива антирезус и контрольной сыворотки. К обеим каплям добавляют исследуемые эритроциты. Кровь размешивают с реактивом су­хой стеклянной палочкой, размазывая на пластинке до образования капли диаметром 1,5 см. Пластинку слегка покачивают. Через 3-4 мин для сня­тия возможной неспецифической агглютинации к каждой капле добавля­ют 5-6 капель физиологического раствора. Затем пластинку покачивают в течение 5 мин.

Трактовка результатов. Наличие хорошо выраженной агглюти­нации в капле слева указывает на резус-лоложительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации в этой капле (гомогенная окраска) свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности иссле­дуемой крови (Rh -). Результат считается истинным лишь при отсутствии признаков агглютинации в правой (контрольной) капле.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: