МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП КРОВИ ЦОЛИКЛОНАМИ

ГРУППЫ КРОВИ. Резус-фактор.

Методические рекомендации для студентов III курса

СОДЕРЖАНИЕ ТЕМЫ

Группы крови - нормальные иммуногенетические признаки крови, по­зволяющие объединять людей в определенные группы по сходству антигенов (изоантигенов) их крови, которые содержатся в эритроцитах, лейкоцитах, тромбоцитах и белках плазмы крови. Группы крови имеют первостепенное значение в практике переливания крови, а также трансплантации органов. К настоящему времени в крови человека обнаружено более 300 различных ан­тигенов, образующих несколько десятков антигенных систем. Принадлеж­ность человека к той или иной группе крови является его индивидуальной биологической особенностью, которая начинает формироваться уже в ран­нем периоде эмбрионального развития и не меняется в течение всей жизни. Строма каждого эритроцита вмещает в себя большое число антигенов, харак­теризующих специфические признаки организма людей. Все антигены объе­динены в группы, получившие различные названия: АВО, резус и другие.

Наука о группах крови возникла в конце XIX века как один из разделов общей иммунологии.

Группы крови системы АВО открыты в 1901 г. К.Ландштейнером. Смешивая эритроциты одних лиц с сыворотками крови других, он обнару­жил, что при одних сочетаниях сывороток и эритроцитов наблюдается гемагглютинация (склеивание эритроцитов), при других - её нет. На основа­нии этих факторов К.Ландштейнер привел к заключению, что кровь раз­личных людей неоднородна и может быть условно разделена на три груп­пы, которые он обозначил буквами А, В и С. Вскоре (1902) после этого Декателло и Штурм нашли людей, эритроциты и сыворотки которых отлича­лись от эритроцитов и сывороток упомянутых трех групп. Эту группу они рассматривали как отклонение от схемы Ландштейнера. Однако Я. Янский в 1907 г. установил, что эта группа крови не является исключением из схемы Ландштейнера. а есть самостоятельная группа, и следовательно, все люди по иммунологическим свойствам крови делятся на четыре группы, т.е. Я.Янский открыл четвертую группу крови.

Таким образом, агглютинабельные свойства эритроцитов зависят от имеющихся в них определенных специфических для каждой группы веществ, то есть антигенов (изоантигенов), названных агглютиногенами АВО В соот­ветствии с этим обозначением эритроциты одних людей не имеют агглютино­генов А и В. - группа крови будет соответствовать 0(1) группе; эритроциты других содержат только агглютиноген А, - группа крови - А(11); эритроциты третьих содержат агглютиноген В - группa крови - В(Ш); эритроциты четвер­тых содержат агглютнногены А и В - группа крови будет соответствовать AB(1V).

Групповые антигены системы АВО начинают обнаруживаться в эритро­цитах плода на 2-м месяце эмбриональной жизни. Наибольшей активности и чувствительности к соответствующим антисистемам они достигают к третьему году жизни. Групповые антигены имеются во всех тканях человека, за исклю­чением хрусталика. Агглютинабельностъ эритроцитов новорожденных состав­ляет 1/5 часть агглютинабельности эритроцитов взрослых. Достигнув макси­мума, титр агглютиногенов эритроцитов в течение нескольких десятков лет сохраняется на постоянном уровне, а затем постепенно снижается в количест­венном отношении. В зависимое™ от наличия или отсутствия в эритроцитах групповых агглютиногенов А и В в плазме находятся нормальные (естествен­ные) антитела- гемагглютинины по отношению к этим агглютиногенам У лиц группы крови 0(1) содержатся два типа групповых антител: Анти-А (а) и Анти-В ((в); у лиц группы крови А(П) - изоантитело Анти-В (в), у лиц группы крови В(Ш) изоантитело Анти-А (а) и у лиц группы крови АВ (IV) - оба гемагглютинина отсутствуют. Нормальные изоантитела (гемагглютинины) Анти-А и Ан­ти-В (а и в) являются обычными иммуноглобулинами. Нормальные (естест­венные ) групповые антитела начинают появляться у человека в первые меся­цы после рождения и достигают максимального титра к 5-10 годам. После это­го титр антител держится на высоком уровне в течение многих лет, а затем с возрастом постепенно снижается. Титр гемагглютининов Анти-А варьирует в пределах 1:64 - 1:512, а титр Анти-В - в пределах 1:16 - 1:64. Групповые при­знаки крови передаются по наследству посредством двух независимых друг от друга генов А и В. По наследству передаются и гены гемагглютининов - а и р. Агглютиногены и агглютинины наследуются в коррелятивной связи в виде следующих трех генетических признаков; Оав, Ав, Ва. Антигены системы АВО неодинаково часто встречаются у различных народов. Группа крови, как и любой наследственный признак, развивается под влиянием двух генов: мате­ринского и отцовского.

В большинстве случаев принято буквенное обозначение групп крови, исходя из системы АВО. в скобках дополнительно ставится цифровая принадлежность. Первая группа крови обозначается так - 0(1), вторая - А(11), третья - В(Ш) и четвертая - АВ (IV). то есть ведущим (на первом плане) в обозначении группы крови является агглютиноген.. на втором плане - циф­ровая принадлежность. В ряде случаев обозначение групп крови исходит из полного написания формулы, когда учитываются как агглютиногены эрит­роцитов, так и агглютинины сыворотки, в этом случае группы крови обо­значаются так: первая группа крови - 0ав, Ав, Вв, АВО.

ПОНЯТИЕ О ПОДГРУППАХ КРОВИ

Групповой антиген А не является однородным и может быть подразде­лен на несколько подгрупп - А¹, А², А³, А⁴, А⁵, А, А⁰ и др. Чаще встречаются А¹, А². Групповой антиген В характеризуется большей однородностью, но описаны редкие варианты и этого антигена - В², В³, В, В, В^х и др. Несмотря на то, что они встречаются редко, при определении группы крови приходится с ними считаться только с помощью высокоактивных стандартных сыворо­ток (в том числе и цоликлонов) можно выявить и эти слабо выраженные агглютиногены А и В.

Эритроциты группы 0(1) характеризуются отсутствием в них агглютиногенов А и В и наличием особых специфических Н и О. Они содержатся в эритроцитах не только группы 0(1), но и подгруппы А2 и менее всего - AI и AIB. Существует вариант группы "Бомбей", эритроциты которой не содержат антигены системы АВО, вместе с тем, в сыворотке имеются антитела анти-А, анти-В и анти-Н. Лица с группой крови 0(1) считались универсальными до­норами, т.е. их кровь могла быть перелита людям всех групп без исключения. Однако это положение не является абсолютным, так как есть люди с группой крови 0(1), переливание крови которых может привести к летальному исходу вследствие наличия в крови иммунных гемолизинов и гемагглютининов с высоким титром (1:200 и более). Таким образом, среди универсальных доно­ров могут быть и опасные доноры, вот почему кровь этих лиц может быть перелита только пациентам с одноименной 0(1) группой крови.

В эритроцитах, лейкоцитах, тромбоцитах, а также в плазме крови лю­дей имеется много десятков изоантигенов. По-видимому, истинное число антигенов на поверхности мембран эритроцитов человека значительно пре­вышает число открытых изоантигенов. Наличие или отсутствие в эритроци­тах того или иного антигена, а также различные сочетания их создают большое разнообразие антигенных структур. Наряду с широко распростра­ненными антигенами встречаются и крайне редкие (у 1 из 1000 и у 1 из 3000 обследованных людей).

Есть и лейкоцитарные группы - деление людей на группы в зависимо­сти от наличия в лейкоцитах антигенов, независимых от антигенов системы АВО. и др. В практической работе при переливании крови эти группы не учитываются

Групповую дифференциацию имеют и белки сыворотки крови, однако в практической работе тоже не учитываются.

МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП КРОВИ ЦОЛИКЛОНАМИ

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения группы крови человека по системе АВО взамен стандартных изогемагглютини-рующих сывороток. Антигены (агглютиногены) А и В определяются с по­мощью цоликлонов. У доноров же обязательно выявление не только анти­генов (агглютиногенов) эритроцитов, но и агглютининов ,в сыворотке (плазме) с помощью стандартных эритроцитов

Цоликлоны анти-А и -В представляют собой разведенную асцитическую жидкость мышей-носителей, в которой содержатся специфические иммуног­лобулины, направленные против антигенов А и В человека Неспецифиче­ская полиагглютинация эритроцитов исключена, так как в цоликлонах нет антител иной специфичности. Метод надежен, время наступления реакции агглютинации, её выраженность выше, чем у изогемагглютинирующих сы­вороток, особенно при слабо выраженных антигенах эритроцитов.

Группа крови по системе АВО определяется в нативной крови, стабили­зированной консервантами (глюгицир. цитроглюкофосфат, гепарин и др.); в крови, взятой из пальца, и без консерванта. Наиболее четкая реакция агглю­тинации наблюдается при высокой концентрации эритроцитов. Производится эта процедура в помещении с хорошим освещением при температуре от +15 до +25°С ( см. приложение № I). Перед определением группы крови цоли­клоны необходимо растворить в специальном растворе в течение 1-2 мин. Растворенные цоликлоны хранятся при температуре от +2 до +8°С не белее трех месяцев. Для каждого цоликлона необходимо иметь маркированную пипетку. Определение групп крови проводится одной серией цоликлонов На планшет или пластинку наносится по одной большой капле (0,1 мл) цоли­клона под соответствующими надписями "анти-А" и '"анти-В", Рядом с цоли-клоном наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизи­тельно в 10 раз меньше капли цоликлона (0,01 мл). Цоликлоны и кровь тща­тельно размешивают стеклянной палочкой. Наблюдение за реакцией прово­дится при покачивании планшета в течение не более 2,5 мин. Реакция в каж­дой капле может быть положительной или отрицательной. Положительная реакция выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютина-ты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро склеивающихся и образующих крупные хлопья, вплоть до одного большого агглютината. При отрицательной реакции капля остается равномерно окра­шенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. Агглютина­ция обычно наступает в первые 3-5 с. Наблюдение следует вести в течение 2.5 мин в виду возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Возможные результаты

1. Агглютинации нет ни с одним из цоликлонов - кровь принадлежит к группе 0(1) - эритроциты не содержат антигенов (агглютиногенов) А и В. но есть агглютинины а и в.

2. Агглютинация только в капле с цоликлоном анти-А, кровь принадле­жит к группе А(П). т.е. в эритроцитах есть антиген А,

3. Агглютинация есть только в капле с цоликлоном анти-В, кровь при­надлежит к группе В(Ш). то есть в эритроцитах есть антиген В.

4. Агглютинация есть в обеих каплях - кровь принадлежит к группе АВ (IV), исследуемые эритроциты содержат оба антигена (агглютиногена) А и В.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: