Особенности приготовления препарата
1. Взятие материала и фиксация
| Материал берут очень маленькими кусочками (порядка 1 мм 3), а фиксацию осуществляют обычно в 2 стадии:
вначале глутаральдегидом (стабилизация белков),
затем - четырёхокисью осмия (стабилизация фосфолипидов и контрастирование ткани).
| 2. Уплотнение материала
| 1. Образцы, как обычно, обезвоживают, а для их дальнейшего уплотнения используют эпоксидные смолы .
2. а) Заливку производят в специальных формах,
б) затвердевание смеси происходит путём её полимеризации в термостате,
в) и затвердевшие блоки имеют вид маленьких свечей.
| 3. Приготовление срезов
| 1. Срез делают с помощью ультратома; их толщина - 30-50 нм (ср. с микротомными срезами - 10.000 – 20.000 нм).
2. Затем их переносят на сеточки (играющие роль предметного стекла).
| 4. Окрашивание срезов
| 1. а) Окрашивание срезов сводится к их контрастированию с помощью солей тяжёлых металлов (свинца, вольфрама, урана).
б) Эти соли осаждаются на фосфолипидах мембран и поглощают электроны.
2.Поэтому соответствующие места клетки выглядят более тёмными.
|
Вопросы для контроля
- Назовите методы исследований в цитологии и гистологии
- Каковы отличия световой и электронной микроскопии.
- Из каких этапов состоит приготовление постоянных препаратов
- Какие бывают красители для клеток и тканей?
- Назовите основные части светового микроскопа
Практическая часть занятия
1.Работа с микроскопом
При выполнении практической работы следует помнить следующие основные правила обращения со световым микроскопом:
1.Поставьте микроскоп у края стола так, чтобы окуляр находился ближе к левому глазу. Тетрадь и все предметы, необходимые для работы, расположите справа от микроскопа.
2. Освещение устанавливается только с объективом малого увеличения; следует обязательно проверить центровку положения объектива; конденсор должен быть поднят до упора; диафрагма открыта полностью
3. При помещении препарата на предметный столик покровное стекло должно быть сверху; препарат на предметном столике должен находится против отверстия
4. При фокусировке следует помнить, что расстояние между нижней линзой объектива и препаратом при малом увеличении (х8) - около 10 мм, при большом (х40) - менее 1 мм;
5. С помощью макровинта поднимите предметный столик, чтобы расстояние между препаратом и фронтальной линзой объектива было 3-4- мм. окуляры, плавно поднимите объектив до положения, при котором хорошо видно изображение объекта. Для большей четкости изображения слегка прикройте диафрагму и опустите конденсор.
6. При переводе с малого увеличения на большое следует:
-расположить исследуемый участок препарата в центре поля зрения,
-перевести револьвер с объективом 40 и отцентрировать его положение,
-наблюдая в окуляр, увидите расплывчатое изображение предмета. -дальнейшее изучение объекта производите, пользуясь микровинтом, вращая его на 0.5-1 оборот.
7. После окончания работы с большим увеличением поверните револьвер, установите малое увеличение и снимите препарат.
Общий вид биологического микроскопа МБИ-1: 1-окуляр, 2-поворотная бинокулярная насадка, 3-винт для поворота , 4- револьвер, 5- объективы, 6-подвижный предметный столик, 9-конденсор и ирисовая диафрагма, 7 – препаратодержатель, 8 - подвижные лапки, 10- маковинт (винт грубой наводки), 11 - микровинт, 12 – осветитель, 13 – рукоятки управления,14 - основание штатива, 15 – регулятор освещения, 16 – выключатель.
Литература
Основными учебниками и учебными пособиями для подготовки к практическим занятиям и самостоятельной работы являются:
1. Быков В.Л. Цитология и общая гистология.-СПб.:SOTIS,1998.
2. Гистология/Под ред.Ю.И.Афанасьева.-М.:Медицина,1999.
4. Гистология: Учебник. 2-е изд., перераб. и доп./Под ред. Э.Г.Улумбекова, Ю.А.Челышева.-ГЭОТАР-МЕД, 2001.- 672 с.
5. Лабораторные занятия по курсу гистологии, цитологии и эмбриологии/ Под ред. Ю.И.Афанасьева, А.Н.Яцковского.-М.:Медицина,1999.
Электронные учебные пособия
рекомендуемые для самостоятельной работы:
1.Данилов Р.К., Клишов А.А., Боровая Т.Г., Ващенков В.В. Гистология в мультимедиа.-СПб.:ВмедА, 1998
2.Кузнецов С.Л., Мушкамбаров Н.Н., Горячкина В.Л. Руководство-атлас по гистологии, цитологии и эмбриологии.-М.: ММА им. И.М.Сеченова.
3.Павлов А.В, Гансбургский А.Н., Щербаков О.О. Знаете ли Вы гистологию? InterNet – программа для самостоятельной работы.-Ярославль, ЯГМА, 2000.
Лабораторная работа №2
Общая морфология клетки и клеточных структур
Цель занятия.
После самостоятельного изучения теоретического материала и работы на практическом занятии студент должен знать:
1.Общий план строения клетки, классификацию ее структур. Уметь идентифицировать ядро, плазмалемму, цитоплазму.
2.Связь формы (кубическая, веретеновидная, отростчатая и др.) и структуры клетки с выполняемой функцией.
3.Физико-химическую характеристику цитоплазмы.
4.Строение элементарной клеточной мембраны, ее компонентов.
6.Органеллы общего значения, их роль в жизнедеятельности клетки.
7.Органеллы специального значения, их роль в клетке.
Приборы и материалы. Демонстрационный микроскоп Nikon Eclipse 50i, микроскоп Биолан, постоянные препараты
План изучения темы.
1.Единство и многообразие клеток
1.1. Клеточная теория
1.2.Основные положения теории
1.3.Понятие о дифференцировке
2. Форма клеток и их ядер
2.1. Клетки кубической и цилиндрической формы
2.2. Веретеновидные
2.3. Округлые 2.4. Отростчатые клетки
2.5. Симпласты
3.Клеточные мембраны и структуры клеточной поверхности
3.1. Клеточные мембраны
3.1.1Принцип организации мембран
3.1.2.Особенности плазмолеммы
3.1.3.Функции плазмолеммы
3.2. Способы трансмембранного переноса
3.2.1. Перенос низкомолекулярных веществ через плазмолемму.
3.2.2. Перенос в клетку крупных соединений и частиц (эндоцитоз)
3.2.3. Перенос из клетки крупных соединений и частиц (экзоцитоз)
3.3. Компоненты мембранной системы клеток:
эндоплазматический ретикулум (гладкий и шероховатый),
комплекс Гольджи,
лизосомы,
одномембранные микротельца.
3.4. Двумембранные компоненты клетки
митохондрии
пластиды
4. Немембранные компоненты клетки
микротрубочки
филаменты
рибосомы
включения
Вопросы для контроля.
- Дайте определение понятию “клетка”.
- Перечислите основные функциональные свойства живой клетки.
- Назовите основные составные части клетки.
- Перечислите основные формы клеток у человека.
- Дайте структурную характеристику клеточных мембран согласно жидкостно-мозаичной модели строения мембраны.
- Назовите основные функции плазмолеммы.
- Назовите составные части цитоплазмы.
- Укажите основные химические компоненты матрикса цитоплазмы.
- Дайте определение понятию “органелла”.
- Назовите группы органелл.
- Перечислите мембранные органеллы.
- Назовите немембранные органеллы.
- Перечислите неклеточные структуры тканей, укажите особенности их строения и происхождения.
Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту:
©2015 - 2024 stydopedia.ru Все материалы защищены законодательством РФ.
|