Куриный эмбрион развивается 21 день. Заражение вирусом производится с 5-го по 12-й день.

Топография куриного эмбриона (продольный разрез, 12 дней): 1.Скорлупа 2.Подскорлупная оболочка 3.Воздушная камера 4.Аллантоисная полость 5.Желточный мешок 6.Альбуминный мешок 7.ХАО – хорион-аллантоисная оболочка 8.Амниотическая полость 9.Эмбрион 10.Канатик (соединение желточного мешка с пуповиной). Для заражения выбирают здоровые эмбрионы. Для этого проводят овоскопию. На скорлупе делают пометки карандашом – границы воздушной камеры и местоположение зародыша.

I. Заражение в аллантоисную полость. Все операции проводят асептично с горящей газовой горелкой. Место введения обрабатывают 2% йодированным спиртом, вводят 0,1-0,2 мл жидкости. Отверстие закрывают каплей расплавленного парафина. На скорлупе пишут: -название вируса –дату –фамилию II.Заражение через искусственную воздушную камеру на ХАО. 1.Делается отверстие в области воздушной камеры. 2.Делается окошко «А» 3.Отсасывается воздух из воздушной камеры. 4.В окошко «А» капается вирус содержащая жидкость. Отверстие заклеивается лейкопластырем. 5.На скорлупе пишется название вируса, дата, фамилия.

Б-22-1

I.Индикация вируса в патологическом материале. 1.Обнаружение – световая микроскопия крупных вирусов (Poxviridae), электронная микроскопия. 2.Обнаружение телец-включений. (тельца Бабе-Шенегри при бешенстве) 3.Обнаружение вирусных антигенов: серологические реакции. 4.Обнаружение вирусных НК (ДНК-зонды и ПЦР – полимеразно-цепная реакция). 5.Обнаружение активной формы вируса путем биопробы (лабораторные животные, куриные эмбрионы, культура клеток). 6.Обнаружение гемаглютининов у гемаглютинирующих вирусов (в настоящее время практически не используется по причине наличия более точных методов). Для идентификация выделенного вируса – серологические реакции. 1.РИФ – реакция иммунофлюорисценции. АГ + АТ меченные флюорохромом. Дают контакт 30 минут при 37 С, затем производят тщательный отмыв в физрастворе. Метод обнаружения – флюоресцентное свечение под микроскопом. 2.ИФА – иммуно-ферментный анализ. АГ + АТ с ферментом. Контакт, отмыв, затем добавляют субстрат, который при контакте с АТ-ферментным комплексом дает цветную реакцию. 3.РСК – реакция связывания комплемента. АГ + АТ + комплемент. Контакт. Затем добавляют гем-систему (гемолизин + эритроциты барана). Контакт. Если гемолиза не происходит, значит АГ и АТ связали комплемент. Задержка гемолиза – реакция положительная. Если произошел гемолиз, значит комплемент связан гем-системой – реакция отрицательная. 4.РДП - реакция диффузной преципитиции. АГ + АТ (диффузия в агаровом геле). Метод обнаружения – образование контура преципитации. 5.РНГА – реакция непрямой гемаглютинации. Эритроциты нагружают АГ и при образовании комплекса АГ-АТ происходит агглютинация эритроцитов. 6.РТГА – реакция торможения гамаглютинации 7.РТГАд – реакция торможения гемадсорбции 8.РН – реакция нейтрализации. Вирус + АТ. Контакт. Ввод в чувствительную к вирусу систему. Метод обнаружения – нейтрализация инфекционной активности вируса.

Б-6-1

2.Инактивированные вакцины.

-наработка вирус содержащего материала с использованием злых полевых штаммов.

-Инактивация вируса (формалин, бета-пропиолактон, препараты азадинового ряда, температура, УФО, гамма-лучи, сульфат меди.

-Добавление адьюванта в инактивтрованную вакцину. Адьювант адсорбирует на своей поверхности частицы разрушенного вируса. (сорбент-адьюванты: Al-Al(OH)3, SiO2 или масляные адьюванты).

-Добавление сапонинов для суперраздражающего действия при в/м и п/к инъекциях. Применяют в очень малых концентрациях для образования воспаления в месте введения.

Б-5-1. Неспецифические клеточные и общефизиологические реакции.

-Температура

-Гормоны – снижают резистентность, однако соматотропные гормоны повышают резистентность и усиливают воспалительную реакцию.

-Беременное животное заболевает быстрее и заболевание протекает более тяжело.

-Физиологическое состояние выделительной системы – скорость выделения вируса из организма.

-Гуморальные факторы – наличие сывороточных ингибиторов (термостабильных или термолабильных). У каждого вида преобладает свой тип.

Б-4-2

РНК содержащие: 1)пикорно. Вирион лишен суперкапсида, кубической формы, 22-30 нм. Липидов и углеводов в составе нет. Геном - односпиральная, линейная РНК. Размножение происходит в цитоплазме клеток. В семейство входят 5 родов: Enterovirus- ЖК-заболевания, менингиты, энцефаломиелиты, коньюнкт-ты, везик пораж. -Hepatovirus – Гепатит А человека и обезьян. Cardiovirus – поражение сердца, головного и спинного мозга. Rhinovirus – поражение верхних дыхательных путей, распостраняется аэрогенно. Aphtovirus – включает вирусы ящура. 2)короно – полиморфные вирусы, окр. липопротеидной оболочкой, которая усыпана булавовидными выступами. Размер 60-160нм. 3)калици – чащеобр. углубления на сферической поверхн. капсидов. Размер 30-40нм. 4)тога (α, рубитога) – размер 40-60нм. Куб. тип симметрии, окр. липопротеидной обол. 4)флави (а)пести)- Вирионы представляют собой сферические частицы диаметром 40-60 нм. Нуклеокапсид имеет икосаэдрическую форму и покрыт наружной липопротеиновой оболочкой. Геном представлен одной одноцепочечной нитевидной молекулой РНК. Размножение вируса происходит в цитоплазме, созревание вирионов происходит почкованием через внутрицитоплазматические мембраны и везикулы. 6)бунья – передаются при + переносчиков, Сферич., 90-100нм. Липопротеидная обл. 7)бирна - сферические частицы диаметром 60 нм. Они состоят из сердцевины, содержащей РНК и белок и икосаэдрического капсида, построенного и 92 капсомеров. Вирионы содержат 90% белка, 10% РНК, липидов нет. Геном представлен двумя фрагментами 2-спиральной линейной РНК. 8)рео(орто, рота, фито, фиджи) – прав. многогран., 60-80нм. Особен.: налич. двойного капсида. 10)рабдо(лиса, везикуло) – Q обр. форма, спир. симетр, липопротеидн. обл., на которой многочисл. выступы.11)ретро – 80-100нм, содер. углеводы, жиры и более 10 белков. 12)ортомиксо – 80-120нм, окр. или нитевидная. 13)парамиксо(парамиксо, пневмо, морбилли) – не имеет обол., но имеет липопротеидную мембрану, окр. формы, 120-300нм. 14)артерии – 60нм, сост. из нуклекапсида и липопротеидной обол,

Б-8-2

Пути проникновения: носоглотку (оспа), пищеварительный тракт (ящур), кожного контакта (оспа), при + насекомых (арбовирусы) далее размножается на месте проникновения или в опр. тк. далее разносится с кровью или по нервн. путям. Выделение из организма: с фекалиями, мочой, носовым экссудатом (пантропные инф. вирусы). Ч/з носоглотку (грипп, ринотрахеит). Со слюной (бешенство), из кожн. поражений (оспа), со спермой (лейкоз, ящур). 5)факторов влияющих на чуств. к вирусам: 1)гормоны 2)возраст 3)беременность 4)ионизирующее излучении 5)температура

Б-9-2

Живые противовирусные вакцины представляют собой лиофилизированные взвеси вакцинных штаммов вирусов, выращенных в разл. био системах (КЭ, КК, в лаб жив.). Основным свойством является стойкая утрата способности вызывать в организме привитого жив. типичное инф. заболевание, также обл. способностью «приживляться» в орг. жив., т.е размножатся. Пребывание и размножение вакцинного штамма продолжается обычно 5-10дн. до нескольких недель и не сопр. клин. проявлениями, хар. для данной б., приводят к форм. иммунитета против инф. забл. Преимущества: высокая напряженность и длительность создаваемого ими иммунитета, приближающегося к постинфекц. Возможность для большинства однократного введения. Введение не только подкожно, но и перорально и интерназально. Недостатки: чуств к неблагоприятным факторам. Строгие рамки хранения и транспортировки – темпер – 4-8С. Недопустимо наруш. вакуума в апулах с вакцинами. Строгие соблюдения правил асептики. Контроль качества: 1)всестороние обслед. доноров тк. 2)оценку качества пит. среды и КК на стерильность. 3)Надзор за качеством производственных штаммов вирусов. 4)Создание оптим. усл. для сохр. биоматериалов. 5)опрация готового материала.

Б-9-1

1.Живые вакцины. -Полученные на основе адаптации полевых штаммов к какой либо чувствительной системе. *к культуре клеток. *к куриным эмбрионам *к естественно восприимчивым лабораторным животным. -гетерологичные живые вакцины. (берут от индюков и заражают кур. Куры приобретают резистентность.) -метод селекции (за счет отбора естественных природных штаммов). культуральная вирус вакцина из штамма – К 2.Инактивированные вакцины. -наработка вирус содержащего материала с использованием злых полевых штаммов. -Инактивация вируса (формалин, бета-пропиолактон, препараты азадинового ряда, температура, УФО, гамма-лучи, сульфат меди. -Добавление адьюванта в инактивтрованную вакцину. Адьювант адсорбирует на своей поверхности частицы разрушенного вируса. (сорбент-адьюванты: Al-Al(OH)3, SiO2 или масляные адьюванты). -Добавление сапонинов для суперраздражающего действия при в/м и п/к инъекциях. Применяют в очень малых концентрациях для образования воспаления в месте введения. Инактивированная конц. культур. против ауески свиней и овец

Б-10-1 Вирусы – это мельчайшие живые организмы, размеры которых варьируют в пределах примерно от 20 до 300 мм; в среднем они раз в пятьдесят меньше бактерий. Вирусы нельзя увидеть с помощью светового микроскопа (так как их размеры меньше полудлины световой волны), и они проходят через фильтры, которые задерживают бактериальные клетки. Типы структур: -палочковидные (спиралевидные) –нитевидные -кубической (икосаэдрической) формы.

Б-11-2

1)Связан с качественносвоеобразными защит. механизмами, т.к. вирусы не способны развиваться вне жив. кл. 2)Защита направл. на 2 формы сущ. вируса: вне и вн. клеточную. На покоящиеся форму действуют спец. и неспец. факторы, гуморал и кл. факторы защиты. Вегетативн. формы – интерферон, который препятствует синтезу иРНК вируса. 3)Вирус нетрализующий АТ не реагирует с вирусными инф. НК. 4)Методы и средства нейтрализации вируса эффективны только на опр. этапе. 5)Особые факторы защиты: обр. вн. кл. оксифильных и базофильных гранул и наличие противовирусных ингибиторов. 6)Данный иммунитет длительный, а иногда пожизненный.

Б-11-1

Острое течение инфекции хар. ярким проявлением клин. признаков б. (нарастанием их числа и выраженностью проявления, затем – в зависимости от био. сост. орг, выздоровления или гибели жив.) Примеры острой вирусной инфекции – грипп птиц, свиней и др. Латентное течение инфекции – это течение болезни без проявления клин. признаков (скрытое течение) Ее устанавливают с + серологического, вирусологического и патоморфологического исследования. Животные при латентной инфекции могут быть источником возбудителя б. Разнообразные вирусы могут длительное время скрыто размножаться в организме жив., растений и бактерий. Такое продолжительное размножение вирусов получило название персистенция. Хронические вирусные инфекции, как и латентные, обусловлены персистенцией вирусов, которая лежит в основе тяжелых хронических заболеваний чел. и жив. Резистентность организма, привитого живыми вакцинами, больше обусловлена латентной персистирующей инфекцией, чем выработкой специфических АТ. Латентная инф. не только фактор резистентности естественно-восприимчивого организма, она обусловливает и сохр. самого вируса в природе.

Б-12-1

Мутация – изменчивость, связанная с изменением самих генов. Она может быть прерывистый, скачкообразный характер и приводит к стойким изменениям наследственных св-в вирусов. Все мутации вирусов делятся на 2 группы: спонтанные и индуцированные; по протяженности их делят на точечные и аберрационные (изменения, затрагивающие значительный участок генома). Точечные мутации обусловлены заменой одного нуклеотида или одной пары комплементарных нуклеотидов (ДНК). Аберрации у фагов обусловлены делециями (выпадением) различного числа нуклеотидов, от одной пары до последовательности, которая обуславливает (детерминирует) одну или несколько ф-ций вируса. Как спонтанные так и индуцир. мутации / на прямые и непрямые. Профл. б.: в производстве живых вакцин – штамм 17Д желтой лихорадки.

Б-12-2

молекулы вирусных ДНК могут быть линейными или кольцевыми, двухцепочечными или одноцепочечными по всей своей длине или же одно цепочечными только на концах. Большинство нуклеотидных последовательностей в вирусном геноме встречается лишь по одному разу, однако на концах могут находиться повторяющиеся, или избыточные участки. Структуре концевых участков вирусных ДНК существуют также большие различия в величине генома. Вирусов животных ДНК почти не подвергается модификациям. Например, хотя ДНК клеток-хозяев и содержит много метилированных оснований, у вирусов имеется в лучшем случае лишь несколько метильных групп на геном. Размеры вирионов РНК - вирусов сильно варьируют - от 7.106 дальтон у пикорнавирусов до >2.108 дальтон у ретровирусов; однако размеры РНК и, следовательно, объем содержащейся в ней информации различаются в значительно меньшей степени. РНК пикорнавирусов - вероятно, наименьшая из известных - содержит около 7500 нуклеотидов, а РНК парамиксовирусов - едва ли не самая крупная - почти 15000 нуклеотидов. По-видимому, всем независимо реплицирующимся РНК-вирусам нужен какой-то минимум информации для репликационной системы и капсидного белка, но у них отсутствует очень сложная добавочная информация, которой могут обладать крупные ДНК-вирусы.

Б-13-1

Наследственность – это св-во организмов обеспечивать материальную и функциональную преемственность между поколениями, а также обусловливать специфический характер индивидуального развития. Изменчивость – это св-во, противоположное наследственности. Изменчивость вирусов может быть обусловлена мутацией генов, сочетанием их при скрещивании и различным проявлением признаков, зависящих от внешних условий (модификационная изменчивость

Б-13-2

Семество ДНК содержащие:1)покс: а)ортопокс(оспа КРС), парапокс(о птиц), карпипокс(о. овец и коз), лепорипокс, суипокс, авиапокс, энтмопокс. Вирионы этого семейства самые крупные – 260-390нм. Имеют кирпичеобразную форму. Покрыты оболочкой с ворсинками, содерж. липиды, устойчивы к хлороформу и эфиру. 2)Герпес(αβγ) – вкл. 80 вирусов. Вирионы -120-200нм., правильный многогранник. Содержат белки, липиды, углеводы. Разр. при УФ-лучах, сохр. при низк. температурах. (Ауески) 3)Придо-вирусы крупные, размножаются в цитоплазме кл. Вирионы при размножении вызывают радужну окр. инф. кл., форма прав. многогранника. 4) Аденовирусы(мастадено, авиаадено) - вирионы аденовирусов отличаются изяществом структуры. В синтезе вирусных частиц участвуют 14 видов белков, а быть может, и больше. В это число входят и белки, из которых построены компоненты поверхности вириона - гексоны, пентоны и фибриллы. Вызывают острые респираторные заболевания. 5)папаво (папиломо, палиомо) 6)парво (денсо) 7)гепадно 8)АЧС

Б-14-2

1)Гормоны. Кортизон, под его влиянием обостряется течение латентной инф. Тестостерон – оказ. защитное действие. 2)Возраст – связано с влиянием гормонов на организм. Ящур воспроизводится только на новорожденных жив. 3)Беременность – установлено, что большинство врожденных пороков молодняка обуславливается вирусами действующих в матери. 4)Ионизирующее излучение. Под его влиянием изменяется чувствительность организма к патогенному действию некоторых вирусов. Рентгеновское излучение ухудшает течение вирус. инф., т.к. под его влиянием повышается проницаемость сосудов и тк., угнетается защитная роль барьерных систем, снижается бактерицидная активность тк. и крови. Нарушается метаболизм, страдают НК и происход разрыв хромосом в следствии возникает искажение ген. инфы, что ведет к синтезу дефектных белков и угнетается продукция интерферона. 5)Температура.

Б-15-1

Сущ. гипотеза о том, что персистенция вируса обусловлена блоком соревания вируса, в реультате чего в кл. накапливаются нуклеокапсиды. Сборки вируса в таких кл. непроисход. Наличие АТ прерывает острый процесс и вирус выводится, однако в результате вирусемии вирус контактирует с кл. различ. систем, в том числе и с малочуств. Возникает абортивный цикл репродукции вируса. В кл. ситез. субвирусные компоненты – нуклекапсиды. В результате того, что топографическое положение их изменено, они не узанются мембранными белками и не могут вкл. в вирион. Благодаря наличию в оболочке пораженных кл вирусного гликопротеида вызывающего слияние. Нуклеокапсида проникает в новые кл., этим объясянется медленное течение б.

Б-15-2

Очень часто возникает ассоциация бак + вирус, особенно в усл. промышленного ведения животноводства. На комплексах часто регистрируют респираторно-кишечную пат. телят – пневмоэнтерит. Возникновение которой возможно при участии 7-8 вирусных и 4-5 бактериальных агентов.

Б-16-1

Титр – это кол. вируса, содер. в ед. объема материала. Из локальных повреждений, вызываемые вирусами, наиболее известны бляшки и оспины на ХАО КЭ. Если имеются данные обр. то инф. активность вируса может быть измерена в бляшкообр. ед (БОЕ) или оспообр. ед (ООЕ) 1БОЕ = дозе вируса, способной вызвать обр. одной бляшки, а одна ООЕ – одной оспины. Метода: заражают несколько КК или КЭ на ХАО. Высчитывают среднеарифметическое кол. оспин или бляшек. Оно = БОЕ или ООЕ вируса. Рассчитывают сколько БОЕ или ООЕ приход на ед. объема вируссодерж. материала. Это и есть титр. Т=n/Va, где n-сред ариф. бляшек или оспин, а –разведение материала, V – введенная доза. Метод 50%-ного инф. действия. За ед. кол. вируса принимается доза, которая способна вызвать инф. эффект у 50% зараженных. Число таких доз в ед. материала и будет выражать титр вируса в этом материале. Готовыт 10 кратное разведение исл. материала, затем одинаковыми дозами заражают равные группы живых тест объектов. Учит. результат действия и пор. в каком разведение вирус проявил сое действие на 50%. Если сразу такое разведение не найдено то оно расчит. по формуле Т=lgB – (b-50)/(b-a) *lgd, где В – разведние дающие инфекц. эффект более 50%, b – процент дающий инф. эффект более 50%, а – менее 50% d – кратность разведения. За 1ГАЕ принимается такая доза вируса, которая способн. агглютинировать примерно 50% эритроцитов содерж. в том же, что и вирус объеме 1% суспензии отмытых эр. Готовят ряд послед. кратных разведений материала и к каждому разведению добав. 1% суспензию. Реакция оценивается в крестах. Реак. с 2 крестами содерж. 1ГАЕ. которая умножается на кратность разведения.

Б-16-2

КК – это кл. многокл. организма, живущие и размножающиеся в искусств. усл. вне организма. Использ. культуры клеток: 1)Первично-трипсинизированные КК – кл., получ. непосредственно из органов или тк. орг. Этапы получения первичной культуры. 1.Берут ткань молодого животного (лучше всего эмбриона). 2. Кусочки ткани отмывают от эритроцитов в растворе Хенкса. 3. Кусочки ткани заливают теплым раствором трипсина. 4.Раствор ставят на магнитную мешалку, в колбу кладут магнит. 5.Проводят дробную трипсинизацию. 6.Раствор трипсина сливают в центрифужные пробирки. В растворе находятся отдельные клетки. 7.Центрифугация в течении 10 минут – 1000 об/мин, затем трипсин сливают. 8.Клетки помещают в питательную среду: -среда 199 -среда Игла -среда гидролизатлактальбумина. 9.Проводят подсчет клеток в камере Горяева 10.Клетки разводят питательной средой до посевной концентрации от 500 000 до 1 000 000 клеток на мл. 11.Добавляют 10% сыворотки КРС. 12.Разливают в пробирки, матрасы или роллерные колбы и культивируют. 13.После формирования монослоя (3-5 день) молодую культуру клеток заражают вирусом. Лучше всего работать с диплоидными культурами клеток, так как как они свободны от контаменантов (бактерии, грибы, микоплазмы) Используемые растворы. 1.раствор Хенкса (дистилированная вода, соли, антибиотики) 2. раствор Эрла (имеет несколько другой солевой состав) Эти растворы используют как солевую базу для отмывания клеток. 3.Раствор трипсина (0,25%) используют для разделения клеток, для снятия их со стекла. 4.Раствор Версена используют для снятия клеток со стекла при пересеве. Заражение культуры клеток. 1.С выросшего монослоя сливают ростовую питательную среду. 2.Отмывают клетки от ростовой питательной среды р-ром Хенкса или Эрла. 3.Заливают вирус содержащий материал 0,1-0,2 мл. 4.Помещают в термостат (30-60 минут) 5.Вирус содержащий материал удаляют (не обязательно) и заливают поддерживающую среду. 6.Зараженную культуру ставят в термостат (37 С) и ежедневно контролируют просматривая под микроскопом. Методу обнаружения вируса в культуре клеток. ЦПД – цитопатическое действие. 1.Гибель клетки с округлением. Округленная клетка слабо прикрепляется к субстрату и выпадает из монослоя, который приобретает вид кружева. 2.Гибель клетки с фрагментацией. 3.Образование симпластов. Адсорбция эритроцитов на поверхности зараженных клеток. При проникновении вируса через клеточную оболочку в ней задерживаются вирусные белки и оболочка приобретает свойства белков вируса, а следовательно способность к ГАд.

Б-17-1

Пат. материал (ПМ) берут не позднее 2-3ч, полсе падежа. Т.к. возникает обсеменение ПМ посторонней микрофлорой. ПМ могут служить разл секреты и экскреты жив., кусочк. вн. орг, мозг, спиномозг. жид. ПМ берется с учетом тропизма вируса. При жизни берется кровь: у КРС – яремн. вена, свиней – кончик хвоста, смывы со слиз оболоч глаз, носа, рот. полости – стерильным ватником. Слюну в пробирку, при этом вводят пилокарпин. Фекалии – шпателем из прям кишки. Мочу – катетером. Кусочки парсхим. орг. берут с отклон. от норм. ПМ помещ. в стеклян. банки, а банки в термос с охлад. смесью. На термос – бирка с инфой о жив., эпизоотическая ситуация хоз., клин. признаки б. и предположит. диагноз. При подозр. на особо опасн. вир. б. ПМ помещ. в железн. ящик, опечат. и посылается в лабу с нарочным. Методы консервации: 1)хран. 50% р-ре глицерина при 4С, до 1 мес. 2)в усл. глубок замораж. при -70С, до 1 года, но при этом доб стабилизаторы (обезжиренное молоко, р- альбумина и др). 3)Леофилизация – это высушивание заморож. мат. в улс. вакуума.

Б-17-2

Наиболее широко и часто о размножении вируса судят по ЦПД. ЦПД это любое изменение кл. под действием размножающегося в них вируса. Обнаруживается ЦПД морфологически, под микроскопом сравнивая с чистой КК. Часто ЦПД оценивают в крестах и баллах. Формы ЦПД зависят от био. св-в вируса, вида кл, дозы, усл. культивирования. Различают 3 формы ЦПД: фрагментация – разрушение кл. на отдельные фрагменты. Округление – потеря кл. способности прикрепляться к стеклу, вследствие чего кл., обычно принимают шарообразную форму. Симпластообр. – растворение кл. оболочек, вследствие чего цитоплазма соседних кл. сливается в единое целое. Отсут. ЦПД в первом пассаже еще не говорит об отсутствии вируса, который не всегда размножается настолько быстро, чтобы вызвать ярко выраженное ЦПД. Поэтому и прибегают к «слепым» пассажам.

Б-18-1

При РТГА нейтрализуется не только инфекционная, но и гемагглютинирующая активность, т.к. блокируются рецепторы вирионов, ответственные за гемагглютинацию, обр. комплекс АГ+АТ. Принцип РНГА сост. в том, что в пробирке смешают равные объемы сыворотки крови и суспензии вируса и после экспозиции опр., сохр ли в смеси вирус, путем добавления суспензии эритроцитов. Агглютинация эр показывает на наличие, а отсутствие – на отсутствие вируса в смеси. РНГА позволяет решать след. задачи: опр. титр АТ к гемагглитинирующему вирусу в сыворотке; идентифицировать неизвестный гемагглютинирующий вирус по известным сывороткам; установить степень антигенного родства двух вирусов. Достоинства: протота, быстрота, не треб стерил. работы, специфичность, дешевизна. Недостаток: возможна только с гемагглютинирующими вирусами.

Б-18-2

Эмбрионы доставляют из инкубатора, не допуская их охлаждения в пути. Подготовка КЭ к заражению вкл. овоскопирование и дезинфекцию скорлупы, а также соответствующую подготовку рабочего места. Овоскопирование – просмотр яиц против достаточно яркого источника света (овоскоп), в результате чего на неосвещенной стороне скорлупы обр. тени от вн. структур. При этом на скорлупе крандашом отмечают: границу воздушной камеры, место расположения зародыша и участок бессосудистой зоны размером 0,5*0,5см. Опр. жив зародыш или пал. Скорлупу обрабатывают йодированным спиртом, а иногда и фламбируют – обр. пламенем смоченного спиртом тампона. КЭ фиксируют в спец. подствках. Используют стерил. инструменты.

Б-19-1

6 методов заражения КЭ: 1)Заражение в аллантоисную полость (грипп, б Ньюкасла). КЭ фиксируют вертикально тупым концом вверх, на стороне зародыша на 5-6мм выше границы воздушной камеры делают отверстие 1мм. Иглу вводят параллельно продольной оси на глубину 10-12 мм. 2)на ХАО (оспа, чума плотоядных): а)Ч/з естественную воздушную камеру. КЭ в штатив тупым концом вверх, в скрлупе против центра воздушн. камеры окно 15-20мм. Снимают подскорлупную оболочку. На ХАО наносят 0,2 мм суспензии. Отверст. лейкопластырем. б)Ч/з искусственную воздуш. камеру. Штатив горизонтально зародышем вверх. Делают 2 отверстия: над центром воздушн. камеры, другое ).2-0,5см сбоку, со стороны зародыша. Из первого зародыша отсасывают воздух, обр искуст. воздуш. камера, дном которого явл. ХАО, на него наносят инф. жид. Закр. лейкопластырем. 3)В желточный мешок (хламидий, б. Марека): а)КЭ помещают в штатив вертикально. Отвертс. над центром воздушн. камеры, иглу на 3,5-4см под углом 45, противоположн. месту нахожд. зародыша. б)аналог. путь заражения осущ. на горизонтально укрепленном штативе КЭ; при этом зародыш наход. в низу., а желток над ним. 4)В амниотическую полость (грипп, б Ньюкасла): закрыт способ – зародыш. вверх. Иглу вводят затуплен. концом по напр. к зародышу. откр. способ – над воздушной полостью отверстие 1,5-2,5см. Нахрен подскорлупн. оболочк. Пинцет продавливают ХАО по напр. к зародышу. Затем амниотическую оболочку вместе с ХАО и подтяг. к окну, водят туда суспензию. Отпускают. Лейкопластырь. 5)Заражение в тело зародыша. 6)в кров сосуды.

Б-19-2

Животное должно быть чувствительно к данному вирусу. 2)Возраст. Многие вирусы лучше размножаются в орг. молодых и даже новорожденных жив. 3)Животное должно быть абсолютно здоровое. Оно должно быть привезено из благополучного по инф. забл. хозяйства. Пройти карантин (бел. мыши и крысы 14, остальные -21 день), во время которого ведется клин. наблюдение. При обнаружение инфекции всю группу уничтожают.

Б-20-1

Строение: 1.Скорлупа 2.Подскорлупная оболочка 3.Воздушная камера 4.Аллантоисная полость 5.Желточный мешок 6.Альбуминный мешок 7.ХАО – хорион-аллантоисная оболочка 8.Амниотическая полость 9.Эмбрион 10.Канатик (соединение желточного мешка с пуповиной). С 5-12день КЭ могут использоваться для заражения

Б-20-2

1)Обнаружение вирусных АГ. Используют серологические реакции. 1.РИФ – реакция иммунофлюорисценции. Метод обнаружения – флюоресцентное свечение под микроскопом. 2.ИФА – иммуно-ферментный анализ. АТ-ферментным комплексом дает цветную реакцию. 3.РСК – реакция связывания комплемента. Задержка гемолиза – реакция положительная. Если произошел гемолиз, значит комплемент связан гем-системой – реакция отрицательная. 4.РДП - реакция диффузной преципитиции. Метод обнаружения – образование контура преципитации. 5.РНГА – реакция непрямой гемаглютинации. агглютинация эритроцитов. 6.РТГА – реакция торможения гамаглютинации 7.РТГАд – реакция торможения гемадсорбции 8.РН – реакция нейтрализации. Метод обнаружения – нейтрализация инфекционной активности вируса. 2)Обнаружение телец-включений. Представляют собой скопления зрелых вирионов в кл., где шла их репродукция, или массы кл. материала, измененного под влиянием репродукции вируса. 3)Обнаружение виронов. С + эл. микросокопа, только оспа – световой. 4)Биопроба – экспериментальное заражение материалом от больных жив. лаб. или естественно восприимчивых жив.

Б-24-1

Лабораторные исследования. I.Индикация вируса в патологическом материале. 1.Обнаружение – световая микроскопия крупных вирусов (Poxviridae), электронная микроскопия. 2.Обнаружение телец-включений. (тельца Бабе-Шенегри при бешенстве) 3. Обнаружение вирусных антигенов: серологические реакции. 4.Обнаружение вирусных НК (ДНК-зонды и ПЦР – полимеразно-цепная реакция). 5.Обнаружение активной формы вируса путем биопробы (лабораторные животные, куриные эмбрионы, культура клеток). 6.Обнаружение гемаглютининов у гемаглютинирующих вирусов (в настоящее время практически не используется по причине наличия более точных методов). II.Изоляция (выделение) вируса из патологического материала. Проводится не менее трех слепых пассажей, делается биопроба. А)Лабораторные животные (клиника, гибель, пат. изменения) Б)Куриные эмбрионы (гибель, пат. изменения, РГА) В)Культура клеток (ЦПД, РГАд, метод бляшек) III.Идентификация выделенного вируса – серологические реакции. IV.Доказательство этиологической роли. Иногда требуется доказать этиологическую роль выделенного вируса. Для этого используют парные сыворотки крови в серологических реакциях. В качестве АГ используют выделенный вирус, а в качестве АТ – парные сыворотки. Повышение титра антител во второй сыворотке в 4 и более раз свидетельствует о этиологической роли выделенного вируса.

Б-26-2

Используемые растворы. 1.раствор Хенкса (дистилированная вода, соли, антибиотики) 2.раствор Эрла (имеет несколько другой солевой состав) Эти растворы используют как солевую базу для отмывания клеток. 3.Раствор трипсина (0,25%) используют для разделения клеток, для снятия их со стекла. 4. Раствор Версена используют для снятия клеток со стекла при пересеве. Используемые среды. 1.Среда 199 – 20 АМК, более 17 гормонов, всего 69 компонентов. 2.Среда Игла (Eagle) 3.Среда ГЛА (гидролизатлактоальбумина.

Б-21-1.

Обнаружение с + эл. микроскопии в материале от больных жив. может служить доказательством наличия вирусов в этом материале и в некоторых случаях использутеся для диагностики вирусных болезней жив. Что то вякни по ЦПД.

Б-21-2

Асептика – система мер полностью предотвращающая проникновение мо. в макроорганизм при ранениях, хирург. вмешательствах. Антисептика – уничтожение мо. в ранах при + хим. средств.

Б-22-2

Гемадсорбция – соед. эр. с повержностью пораженных вирусом кл. В основе этого явления сродство рецепторов вируса, находящихся на поверхности пораженной кл., с рецепторами эритроцитов, что приводит к их взаимному сцеплению аналогично реакции гемагглютинации. Преимущество реакции сост. втом, что она становится положительной еще до появления отчетливых цитоплазматических изменений. Она может использована для обнаружения и титрования вирусов путем заражения культуры ткани вирусом в разл. разведениях. Использ. для выделения и идентификации парагриппозных вирусов.

Б-23-1

Кусочки парасхим. органов освобожд. от жир. и соед. тк. 10-20г, измельчают и растирают со тсерил. стеклом или песком, готовят суспензию на фосфатном буфере или р-р Хенкса. Центрифугируют 10-15 мин при 1500 об/мин., обирают надосадочную жид., добавляют анитбиотики, проводят посев на пит. среды на стерильность и используют для заражения.

Б-23-2

Адрес веет. Лабы и наименование. Сопроводительная. При этом направляется кусочки парасхим. органов от павшего жив. (или вынужденно убитого). Для установки причины заболевания и падежа. В хозяйстве ООО «Ненавижу вирусологию» в течении 2 недель происходит падеж молодняка с такими то клин. признаки и патологич. изменениями. Результат исл. сообщить по адресу. Главврач. Подпись. В случае отправки крови или сыворотки на бруцеллез, лейкоз, а также на биохим исл. к сопроводиловке прилагатеся 2 экземпляра описи жив.

Б-24-1

1) Скорлупа и подскорлупная оболочка служит хорошей защитой от факторов внеш. среды. 2)КЭ содержат субстрат для выращивания вируса. 3)КЭ устойчивы к воздействиям связанных с выделением исл. материала. 4)КЭ легко доступны, отн. экологичны, не треб ухода, кормления, не обр АТ.

Б-25-2

Работа с вирусным материалом. Требования к работе. 1.Не допускать рассеивания вируса в окружающую среду. 2.Не допускать контаменации (загрязнения) вирус содержащего материала бактерия ми и грибами. 3. Личная безопасность. Для выполнения этих треб. необходимо собл. след. правила работы: 1)Наглухо застегнутый халат. 2)В Лабе не принимать пищу и воду. 3)Чистота и порядок на раб. месте, не должно при работе быть лишних предметов. 4)Работать сидя, не отвлекаясь. 5)Переливать жидкий вирус только над дизенфецир. жидкостью. 6)не брать пипеток в рот, пользоваться грушей. 7)Использ. предметы собирать в стерилизатор. 8)Запр. выносить ПМ за пределы ауд. 9)При разлитии исл. материала сообщить преподавателю для проведения дезинфекции. 10)После работы привести в порядок раб. место.

Б-27-1

Используют: 1)для обнаружения вируса в ПМ 2)первичного выделения вируса из ПМ 3)накопления вирусной массы 4)поддержания вируса в лабе в активном сост. 5)титровании вируса 6)в качестве тест-объекта в РН 6)получение гипериммунных сывороток. Использ. жив.: белые мыши (бешенство, ящур), белые крысы (грипп свиней, б. Ауески), Мор. свинки (бешенство, ящур, чума плотоядных) Кролики (бешенство, миксомы кроликов).

Б-27-2

1)по ЦПД или ЦПЭ (цитоплазматич. эффект); по положительной РГад 2)по обр. бляшек; обнаружение вн.кл. вкл.; выявление вирусов в реакции РИФ 3)обнаружение интерференции вирусов; по подавлению метаболизма кл (цветная проба); эл. микросокпии и др.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: