Реакция иммунофлюоресценции (РИФ, метод Кумбса)

СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Серологические исследования — это методы изучения определенных антител или антигенов в сыворотке крови больных, основанные на реакциях иммунитета. С их помощью также выявляют антигены микробов или тканей с целью их идентификации.

Обнаружение в сыворотке крови больного антител к возбудителю инфекции или соответствующего антигена позволяет установить причину заболевания.

Серологические исследования применяют также для определения антигенов групп крови, тканевых антигенов и уровня гуморального звена иммунитета.

Серологические исследования включают в себя различные серологические реакции:
1. Реакция агглютинации.
2. Реакция преципитации.
3. Реакция нейтрализации.
4. Реакция с участием комплемента.
5. Реакция с использованием меченых антител или антигенов.

Реакция агглютинации

Реакции агглютинации — это простые реакции склеивания корпускулярных антигенов с помощью антител.

Различают:
— прямые реакции агглютинации, которые используют для выявления антител в сыворотке крови больного. Добавление взвеси убитых микробов к сыворотке больного вызывает образование хлопьевидного осадка (положительная реакция склеивания микробов антителами). Используется для определения брюшного тифа, паратифа и др.
— реакция пассивной, или непрямой гемагглютинации основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами, взаимодействие которых с соответствующими антителами сыворотки крови больных приводит к образованию фестончатого осадка. Используется для определения беременности, выявления повышенной чувствительности больных к лекарственным препаратам и гормонам;
— реакция торможения гемагглютинации основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать вирусы, которые в результате теряют свойство склеивать эритроциты. Используется для диагностики вирусных болезней;
— реакция коагглютинации — разновидность реакции агглютинации, в которой антигены возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой.

Реакции преципитации

Реакции преципитации — реакции, в которых происходит осаждение комплекса антиген-антитело. Антиген в данном случае должен быть растворимым. Осадок комплекса антиген-антитело называется преципитатом. Реакцию ставят путем наслоения раствора антигена на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении антиген-антитело на границе этих растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Наибольшее распространение получила реакция преципитации в полужидком геле агара (двойная иммуно-иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др.). Реакцию используют для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента.

Реакция нейтрализации

Реакция нейтрализации основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки или ткани. При отсутствии повреждающего эффекта смеси антител и микробов или их токсинов на культуру клеток говорят о специфичности взаимодействия комплекса антиген-антитело.

Реакции с участием комплемента

Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате присоединения его к комплексу антиген-антитело. Если комплекс антиген-антитело не образуется, то комплемент присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело, вызывая тем самым гемолиз (разрушение) эритроцитов (реакция радиального гемолиза). Применяется для диагностики инфекционных болезней, в частности, сифилиса.

Реакция с использованием меченых антител или антигенов

Реакция основана на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками, меченными флюорохромами, способны светиться в ультрафиолетовых лучах люминисцентного микроскопа (реакция иммунофлюоресценции).

В иммуноферментном анализе вместо флюорохромов иммунную сыворотку можно метить ферментом (пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой). Реакцию оценивают по окрашиванию раствора в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфотаза) цвет.

Радиоиммунологический метод — количественное определение антител или антигенов, меченых радионуклидами, с применением аналогичных антигенов или антител.

Методы применяют для выявления антигенов микробов, определения гормонов, ферментов, лекарственных веществ и иммуноглобулинов.
Серологические исследования — это методы изучения антигенов или антител в биологическом материале больных, основанные на определенных реакциях иммунитета. Обнаружение в биологическом материале антител к возбудителю инфекции или антигенов позволяет установить причину заболевания.

Серологические исследованияне обладают 100% специфичностью и чувствительностью при диагностике инфекционных заболеваний. Поэтому оценивать их результаты нужно с учетом клинической картины заболевания. Этим обусловлена необходимость использования для диагностики инфекции нескольких тестов, а также применение методов Western-blot, подтверждающих результаты скрининговых методов.

«Иммуноблоттинг (Вестерн-блот, Western-blot) является фактически конечным верификационным (подтверждающим) методом в цепи иммунологических исследований, которые позволяют сделать окончательное лабораторное заключение. Особенно важный данный тест для подтверждения или опровержения инфекционного заболевания (например, коклющ, боррелиоз и т.д.). Метод Вестрен-блота, как правило, необходим после обнаружения положительных антител класса IgG инфекционного процесса, т.к. именно в такой комбинации происходит более правильная лабораторная интерпретация результатов и дальнейшая тактика лечения пациента. Для постановки Вестерн-блота используют специальные нитроцеллюлозные полоски, на которые методом горизонтального и затем вертикального иммунофореза перенесены белки в порядке нарастания молекулярного веса. Антитела сыворотки пациента взаимодействует с белками в определенных зонах полоски, а дальше происходит ход реакции аналогичный иммуноферметному анализу (ИФА)»,- объясняет к.мед.наук, медицинский директор лаборатории СИНЭВО Украина, Оксана Владиславовна Небыльцова.

Биологический материал, используемый для серологического исследования

• Сыворотка крови
• Слюна
• Фекальные массы

Для диагностики каких состояний используются серологические исследования

Целью серологических исследований является установление эффективности проведенного лечения после выздоровления пациента, а также обнаружение рецидива заболевания. Кроме того, серологические методы могут выявить такие заболевания как:

• Амебиаз
• Лямблиоз
• Описторхоз
• Трихинеллёз
• Токсоплазмоз
• Токсокароз
• Цистицеркоз
• Эхинококкоз
• ЗППП

Основные методы, используемые в серологической диагностике

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ, метод Кумбса)

Разновидности метода:

Прямой: микробы или антигены тканей или микробы обрабатваются специальными сыворотками с антителами, а также меченными флюорохромами, которые светятся в УФ-лучах. Бактерии, таким образом, светятся в виде каймы зеленого цвета по периферии клетки. Наблюдается в люминисцентном микроскопе.

Непрямой: мазки обрабатываются антителами антимикробной кроличьей сыворотки. Затем антитела, которые не связались с антигенами микробов, отмываются. Таким образом, выявляются оставшиеся на микробах антитела. В итоге, образуется комплекс микроб + антикроличьи антитела + антимикробные кроличьи антитела, помеченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдается в люминесцентном микроскопе.

Для оценки результатов существует четырёхбалльная шкала, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов:

+ очень слабое свечение клетки

++ слабое свечение периферии клетки

+++/++++ яркое свечение клетки

Титром реакции считается разведение сыворотки с результатом результат реакции +++ или ++++.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: