Сделай Сам Свою Работу на 5

Методы создания анаэробных условий





ЗАНЯТИЕ 1.1.5

 

Физиология микробов. Бактериологический метод диагностики (продолжение). Методы культивирования облигатных внутриклеточных паразитов

 

Цель занятия:

изучить условия и методы культивирования анаэробных микроорганизмов, методы культивирования облигатных внутриклеточных паразитов.

 

Студент должен знать:

  1. Способы получения энергии бактериями (дыхание, брожение).
  2. Методы культивирования анаэробов.
  3. Методы культивирования риккетсий, вирусов.
  4. Типы взаимодействия вируса с клеткой, стадии репродукции вируса.

 

Студент должен уметь:

применять бактериологический метод диагностики для идентификации бактерий.

 

Студент должен владеть:

· алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

· методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей.

Работа № 1. Схема бактериологического метода диагностики анаэробных инфекций

Цель: выявить особенности бактериологического метода диагностики для анаэробных инфекций.

Самостоятельная работа:разобрать схему выделения и идентификации микроорганизмов с анаэробным типом дыхания.



 

 

Алгоритм выделения чистых культур анаэробных микроорганизмов

 

1 этап

 

 

 


2 этап

 

3 этап


а) г)

4 этап

 


 

 


 

 

б)  

 


 

д)

 


 

в)

 

 
1 этап. Забор и доставка исследуемого материала

2 этап. Посев материала на питательные среды с целью получения изолированных колоний

(среды обогащения: сахарный бульон, тиогликолевая среда, железосульфитная среда)

3 этап. Накопление чистой культуры

4 этап. Идентификация выделенной чистой культуры:

а) изучение морфологических и тинкториальных свойств;

б) изучение культуральных свойств;

в) изучение биохимических свойств;

г) биопроба на лабораторных животных – изучают клинику и патогенез заболевания, реакция нейтрализации токсина на лабораторных животных;

д) определение чувствительности микробов к антибиотикам диско-диффузионным методом (метод бумажных дисков).



Вывод: ___________________________________________________________________________

___________________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Работа № 2. Методы создания анаэробных условий

Цель: изучить методы создания анаэробных условий (см. теоретическую справку).

Самостоятельная работа: рассмотреть предложенные питательные среды и оборудование для культивирования анаэробов, назвать метод создания анаэробных условий.

Метод Рисунок Результат
1) Вейнберга (сахарный агар)  
2) анаэростат, эксикатор  
3) тиогликолевая среда    
4) метод Фортнера    

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Работа № 3. Биохимическая активность анаэробов

Цель: изучить биохимическую активность анаэробных бактерий.

Самостоятельная работа: указать, какая биохимическая активность анаэробов проявляется на демонстрационных средах.

Среда Рисунок Результат
1) Вильсона - Блера  
2) молоко  
3) Цейсслера (кровяно-сахарный агар)    

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 


Работа № 4. Методы культивирования риккетсий, хламидий, вирусов

 

Цель: разобрать основные принципы выделения и индикации облигатных внутриклеточных паразитов.

Самостоятельная работа:описать основные живые модели для культивирования внутриклеточных паразитов.



Внимание!Заражение эмбриона происходит в асептических условиях, а вируссодержащий материал должен быть освобожден от бактерий путем добавления антибиотиков.

Куриный эмбрион

1. Воздушное пространство

2. Отверстие в скорлупе

3. Скорлупная оболочка

4. Хорионаллантоисная оболочка

5. Желточный мешок

6. Белок

7. Амнион

8. Плод

9. Аллантоисная полость

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 


Культура тканей

Нормальная культура ЦПД ЦПД

(очаговая гибель) (образование симпластов)

 

 

 


___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 


Лабораторные животные


Вывод:_______________________________________________________________________

 

 


Подпись преподавателя___________________________________________________

Самостоятельная работа во внеурочное время

Ответить на вопросы:

1) Что изображено на фотографии? Цель применения устройства? Какие дополнительные технические средства и среды нужно использовать?

Дать классификацию микробов по типу дыхания.

 


Заполнить таблицу по основным знаниям физиологии микроорганизмов

Микроорганизмы Тип питания, паразитизм Тип дыхания Пример питательной среды
Клостридии        
Риккетсии        
Вирусы        

 

Подпись преподавателя___________________________________________________

Теоретическая справка

К работе № 2

Методы создания анаэробных условий

1) Физические методы. Методы основаны на выращивании микроорганизмов в среде без воздуха

•Посев в среды, содержащие редуцирующие и легко окисляемые вещества:

В качестве редуцирующих веществ обычно используют кусочки (около 0,5 г) животных или растительных тканей (печень, мозг, почки, селезенка, кровь, картофель, вата). Эти ткани связывают растворенный в среде кислород и адсорбируют бактерии. Чтобы уменьшить содержание кислорода в питательной среде, ее перед посевом кипятят 10-15 мин, а затем быстро охлаждают и заливают сверху небольшим количеством стерильного вазелинового масла. Высота слоя масла в пробирке около 1 см. В качестве легко окисляемых веществ используют глюкозу, лактозу и муравьино-кислый натрий.

Лучшей жидкой питательной средой с редуцирующим веществами является среда тиогликолевая, которая используется для накопления анаэробов при первичном посеве из исследуемого материала и для поддержания роста выращенной чистой культуры анаэробов.

• Посев микроорганизмов в глубину плотных питательных сред.

Посев уколом. Применяется для выращивания анаэробов или выявления характерного признака микроба, так как рост по уколу типичен для ряда бактерий и длительного хранения культур. При посеве уколом в пробирку с прямым агаром или столбиком желатины держат дном кверху, вынимают пробку и обжигают край пробирки. Материал, содержащий микробы, забирают простерилизованной на пламени длинной совершенно прямой платиновой иглой и прокалывают ею столбик питательной среды снизу вверх почти до самого дна пробирки. Вынимают иглу, обжигают край пробирки и пробки, закрывают пробирку, прожигают иглу, ставят ее в подставку, надписывают пробирку и помещают в штатив.

• Механическое удаление воздуха из сосудов, в которых выращиваются анаэробные микроорганизмы

Удаление воздуха производят путем его механического откачивания из специальных приборов - анаэростатов, в которые помещают чашку с посевом анаэробов. Переносной анаэростат представляет собой толстостенный металлический цилиндр с хорошо притертой крышкой (с резиновой прокладкой), снабженный отводящим краном и вакуумметром. После размещения засеянных чашек или пробирок воздух из анаэростата удаляют с помощью вакуумного насоса.

• Замена воздуха в сосуде каким-либо индифферентным газом

Замену воздуха индифферентным газом (азотом, водородом, аргоном) можно производить в тех же анаэростатах путем вытеснения его газом из баллона.

 

2) Химические методы основаны на поглощении кислорода воздуха в герметически закрытом сосуде (анаэростате, эксикаторе) такими веществами, как пирогаллол или гидросульфит натрия

3) Биологические методы основаны на совместном выращивании анаэробов со

строгими аэробами (метод Фортнера)

Для этого из застывшей агаровой пластинки по диаметру чашки вырезают стерильным скальпелем полоску агара шириной около 1см. Получается 2 агаровых полудиска в одной чашке. На одну сторону агаровой пластинки засевают аэроб, например, часто используют Staphylococcus aureus или Serratia marcescens. На другую сторону засевают анаэроб. Края чашки заливают расплавленным парафином и помещают в термостат. При наличии подходящих условий в чашке начнут размножаться аэробы. После того как весь кислород в пространстве чашки будет ими использован, начнется рост анаэробов (через 3-4 суток). В целях сокращения воздушного пространства в чашке питательную среду наливают возможно более толстым слоем.

 

4) Комбинированные методы основаны на сочетании физических, химических и биологических методов создания анаэробиоза

К работе № 3

Культивирование вирусов

Для культивирования вирусов используют:

1) Куриные эмбрионы. Куриный эмбрион - удобная модель для культивирования вирусов с целью получения вирусов и для приготовления диагностических, профилактических и лечебных препаратов - диагностикумов и вакцин. Куриные зародыши используют в возрасте от 8 до 12 дней, перед заражением инфекционным материалом скорлупу яйца над воздушной камерой обрабатывают 70% спиртом, обжигают, смазывают йодом (2% настойка), вторично протирают спиртом и обжигают. Вируссодержащий материал, обработанный для удаления бактериальной флоры, в асептических условиях наносят на хорион-аллантоисную оболочку или вводят в желточный мешок, аллантоисную полость, либо в амнион (ткань эмбриона). После заражения в аллантоисную полость отверстие заливают парафином; если материалом заражают хорионаллантоис, отверстие в скорлупе закрывают стерильным покровным стеклом, края которого замазывают парафином. После инфицирования эмбрионы помещают в термостат при 37°С. Признаки репродукции вируса проявляются особенно четко в месте заражения на хорионаллантоисной оболочке в виде очагов поражения и геморрагий.

2) Культуру клеток (тканей). Клетки получают из тканей животных и человека. Их делят:

- на первичные, которые используют в течение одной генерации. Первичные клетки получают из эпителиальной или соединительной ткани. Они растут в суспензии, при оседании прочно прикрепляются к стенке флакона или пробирки в виде монослоя;

- полуперевиваемые сохраняются в течение 50 пассажей или года. Они относятся к соматическим диплоидным клеткам человека, которые не претерпевают злокачественного перерождения;

- перевиваемые, которые длительное время размножаться in vitro. Однослойные культуры клеток готовят из нормальных, чаще эмбриональных линий клеток (клетки амниона человека, почек обезьяны) и злокачественных линий клеток (злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Hep - 3 из лимфоидной карциномы).

Репродукция вирусов в культуре клеток сопровождается цитопатическим действием (ЦПД); которое проявляется в изменении морфологии клеток и их гибели. Характер и время проявления ЦПД зависит от вида вируса

 

3)Лабораторных животных (белых мышей, хомяков, крыс, кроликов и т.д.). Их используют для создания моделей вирусных инфекционных болезней и выделение вирусов. Чувствительность животных к вирусам зависит от вида животного и его возраста. Репродукция вируса сопровождается клиническими проявлениями болезни или гибелью животного.

 

 

 








Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту:



©2015 - 2024 stydopedia.ru Все материалы защищены законодательством РФ.