ТЕМА: ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ. МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ.

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Наследственность. Организация генетического аппарата у бактерий (нуклеоид, плазмиды, IS-последовательности, транспозоны).

2. Принципы функционирования бактериального генома. Организация оперона. Генотип и фенотип.

3. Плазмиды, классификация, структура и свойства плазмид. R-плазмида, особенности структуры и функции. Плазмиды бактериоциногении.

4. Изменчивость микробов. Модификации у бактерий, значение, основные проявления и свойства (ненаследственный характер, адаптивность, высокая частота прямых и обратных изменений, множество индуцирующих факторов).

5. Генотипическая изменчивость. Мутации и их классификация. Мутагены. Фенотипические проявления мутаций. Судьба мутантов. Диссоциация у бактерий. Влияние отбора. Система репарации повреждений генома.

6. Рекомбинационная изменчивость. Механизмы образования комбинированных геномов. Частота изменений отдельных признаков. Трансформация, трансдукция, конъюгация.

7. Практическое значение знаний о генетике микробов. Принципы генетического картирования.

8. Методы генетического анализа (молекулярная гибридизация, полимеразная цепная реакция ПЦР, секвенирование).

9. Понятие о генной инженерии и использование ее методов в микробиологии и биотехнологии. Получение и применение генно-инженерных вакцин и цитокинов.

ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

1► Исследование H- и О- модификаций Proteus vulgaris на МПА с фенолом и без него.

Модификационная изменчивость культуральных свойств штамма Proteus vulgaris.

Чашки с МПА (одна с фенолом, другая без фенола) засеваются штриховым методом культурой Proteus vulgaris. Учет результатов проводится через сутки после посева.

МПА без фенола МПА с фенолом

Н-форма О-форма

Вывод: ______________________________________________________________________________________

2►Изучение и описание S- и R- форм колоний энтеробактерий на пластинчатом МПА.

Сравните культуральные свойства энтеробактерий в S- и R- форме:

S-колония ___________________________________________________________________________________

R- колония ___________________________________________________________________________________

3► Выявление ауксотрофных мутантов методом отпечатков (реплик).

Взвесь бактерий обрабатывают мутагеном (УФО) и разведения засевают на чашки с МПА. После инкубации выросшие колонии переносят с помощью репликатора на чашки с МПА и минимальным агаром. После инкубации в термостате производят сравнение роста колоний на обычном и минимальном агаре. Отсутствие роста колоний на минимальном агаре соответствует расположению колоний ауксотрофных мутантов на полноценном МПА. На рисунке обведите красным карандашом колонии ауксотрофных мутантов.

МПА Минимальный агар

Вывод: ______________________________________________________________________________________

4►Изучение роста лактозоположительных и лактозоотрицательных колоний E.coli на среде Эндо.

Укажите формы изменчивости ___________________________________________________________________

5►Учет опытов по трансформации, трансдукции, конъюгации.

Трансформация______________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

Опыт по трансформации:

Трансдукция _________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

Опыт по трансдукции:

Материал исследования	Донор (указать генотип) ______________________________________________ ___________________________________________________________________ Реципиент (указать генотип) __________________________________________ Среда Эндо
Ход исследования	Приготовить смыв реципиентной культуры (E.coli). Смыв внести в две пробирки. В пробирку №1 добавить физраствор (контроль). В пробирку №2 внести фаголизат из культуры донора. Инкубация в термостате. Пересев из обеих пробирок на среду Эндо.
Учет опыта (сделать рисунок)	Рекомбинат (указать генотип) _________________________________________

Конъюгация__________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

Опыт по конъюгации:

6► Определение бактериоциногенности культур микроорганизмов.

Бактериоцины _________________________________________________________________________________

Бактериоциногенность __________________________________________________________________________

Бактериоциногенотипирование ___________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

Бактериоцинотипирование ______________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

Принцип метода для определения бактериоциногенности: исследуемые культуры бактерий засевают уколом в чашку с МПА. Выросшие культуры убивают парами хлороформа. После испарения хлороформа поверхность агара заливается расплавленным и остуженным 0,7% МПА, смешанным с индикаторной культурой.

Учет результатов проводится через сутки после посева по зонам подавления роста индикаторной культуры вокруг колоний, обладающих бактериоциногенностью.

Вывод:_______________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: