ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Ферменты бактерий, классификация. Способы изучения биохимических свойств микроорганизмов. Практическое использование биохимической активности в идентификации бактерий
2. Определение сахаролитических свойств, состав сред Гисса; определение протеолитических свойств, определение каталазной и оксидазной активности.
3. Принцип работы и особенности применения приборов автоматической идентификации бактериальных культур (гемокультиватор, автоматический анализатор).
4. Особенности культивирования риккетсий и хламидий.
5. Бактериофаги (фаги). История открытия. Морфология, структурные особенности, химический состав и свойства фагов.
6. Вирулентные фаги. Фазы взаимодействия с бактериальной клеткой. Результаты взаимодействия фага и клетки. Умеренные фаги. Профаг. Явление лизогении. Фаговая конверсия.
7. Методы выделения и титрования бактериофагов на плотных и жидких питательных средах.
8. Применение фагов в микробиологии и медицине. Фагодиагностика и фаготипирование.
ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА
1►Изучение биохимических свойств микроорганизмов для идентификации чистой культуры бактерий.
Способы изучения биохимических свойств бактерий:
1."Пестрый ряд" Гисса («пробирочный» классический тест):
Состав:______________________________________________________________________________________
Принцип действия _____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Учет результатов биохимической активности эшерихий и стафилококка
на "пестром ряду" Гисcа:
Субстрат
| Лактоза
| Глюкоза
| Маннит
| Мальтоза
| Сахароза
| Индол
| Сероводород
| E.coli
|
|
|
|
|
|
|
| S.aureus
|
|
|
|
|
|
|
|
2.Система индикаторная бумажная – СИБ.
Принцип действия _____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
3.Планшетные тест-системы – это системы с высушенными или замороженными субстратами и индикаторами в микроемкостях (лунках) в виде специальных планшетов (панель биохимической дифференцировки энтеробактерий – ПБДЭ).
| Принцип действия _____________________________
_____________________________________________
______________________________________________
______________________________________________
______________________________________________
| Учет результатов биохимической активности бактерий может проводиться визуально (с помощью кодовых карточек) или с помощью автоматических анализаторов (например, ATB-expression).
Принципы работы анализатора:
- колориметрический для биохимической идентификации бактерий и грибов;
- турбидиметрический для определения антибиотикочувствительности.
4. Определение каталазной активности:
Принцип метода _____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
Результат ___________________________________________________________________________________
5. Определение оксидазной активности:
Принцип метода _____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
Результат ___________________________________________________________________________________
2►Принцип работы и особенности применения гемокультиватора
Коммерческая система для гемокультур Bact/Alert
Гемокультиваторы предназначены для выделения микроорганизмов из крови и других стерильных жидкостей. Принцип их работы основан на автоматизированном выявлении роста микроорганизмов в образцах крови, помещенных во флакон со специальной средой. Индикация микробного роста во флаконах проводится с помощью выявления флюоресценции или колориметрически. Использование автоматических систем позволяет повысить чувствительность метода (100 клеток в 1 мл) и гарантирует отсутствие посторонней контаминации микроорганизмами (флакон не открывают в течение всего мониторинга).
Работой системы управляет компьютер. Во флакон со средой шприцем вносят исследуемый образец крови. Флакон помещают в индивидуальную ячейку инкубационного блока (в одном блоке 60 ячеек), дальнейший процесс происходит в автоматическом режиме.
Флаконы инкубируются на борту аппарата при температуре 37°С, каждые 10-15 минут инкубации проводится автоматическое считывание признаков микробного роста во флаконе (по изменению цвета индикаторного диска на дне флакона). При появлении роста микроорганизмов срабатывает звуковая и световая индикация, флакон извлекают из аппарата для дальнейшей работы – выделения чистой культуры и ее идентификации.
БАКТЕРИОФАГИ
Бактериофаги_______________________________________________________________________________
Лизогения__________________________________________________________________________________
Лизогенная культура _________________________________________________________________________
Лизогенная система __________________________________________________________________________
Профаг _____________________________________________________________________________________
Лизогенная конверсия ________________________________________________________________________
Схема выделения и идентификации бактериофагов:
Й этап.
Выделение бактериофагов (фильтрация материала через бактериальные фильтры, нагревание до 75°С или обработка хлороформом с целью устранения сопутствующей микрофлоры. Получение фагофильтрата.
Й этап.
Качественное определение бактериофагов в исследуемом материале (фильтрате) на жидких и плотных питательных средах.
а) Методы индикации бактериофагов на жидких питательных средах.
В две пробирки с жидкой питательной средой засеяли индикаторную культуру бактерий (E. coli). В первую пробирку внесли исследуемый фагофильтрат. Учет результата.
б) Методы определения бактериофагов на плотных питательных средах.
На чашку с МПА засевают газоном кишечную палочку и пипеткой наносят исследуемый фильтрат. Инкубация в термостате.
|
| E.coli(посев газоном)
Результ ___________
__________________Вывод ____________
__________________
|
Метод Фишера
Фаг наносится на поверхность засеянных на МПА культур бактерий
Результат _________________________
__________________________________
Вывод:____________________________
__________________________________
| Используемые культуры бактерий в секторах:
1. Shigella flexneri
2. Shigella sonnei
3. Salmonella Schottmuelleri
4. Escherichia coli
5. Salmonella Typhi
6. Salmonella Paratyphi A
| Метод Фюрта
Фаг вносится в расплавленный и остуженный агар, на который штрихом засевают культуры бактерий
Результат _________________________
__________________________________
Вывод:____________________________
|
3-й этап.Титрование бактериофагов.
Титрование ___________________________________________________________________________________
Титр бактериофага _____________________________________________________________________________
а) Титрование в жидкой питательной среде по Аппельману:
Разведения
| 10-1
| 10-2
| 10-3
| 10-4
| 10-5
| 10-6
| 10-7
| 10-8
| 10-9
| 10-10
| КК
| КФ
| Лизис
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| (-) результат - рост индикаторного штамма (муть)
(+) результат - фаголизис индикаторного штамма (прозрачность).
Титр бактериофага равен ____________
б) Титрование на плотной питательной среде по Грациа(метод агаровых слоев).
Количество бактериофагов выражают в количестве бляшкообразующих единиц на 1 мл исследуемого материала (БОЕ/мл).
1 мл разведения _________
число негативных колоний __________
| 1 мл разведения _________
число негативных колоний __________
| Результат: концентрация бактериофагов в фаголизате ___________ БОЕ/мл
Практическое использование бактериофагов:
1. Фаготерапия____________________________________________________________________________
2. Фагопрофилактика ______________________________________________________________________
3. Фагодифференцировка __________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________
4. Фаготипирование _______________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________
Цель фаготипирования ______________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________
Фаготипирование выделенных чистых культур бактерий:
Штаммы S. aureus (газон) из разных источников
Фагоформула штамма № 1 __________________
|
Фагоформула штамма № 2 __________________
|
Вывод(отметить сходство и различия двух штаммов и указать связь с источником их выделения) ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ ЗАНЯТИЕ № 6
Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту:
©2015 - 2024 stydopedia.ru Все материалы защищены законодательством РФ.
|