Сделай Сам Свою Работу на 5

В реакциях, катализируемых НАД-зависимыми дегидрогеназами, в качестве кофермента участвует никотинамидадениндинуклеотид (НАД).





Определение скорости секреции и pH слюны.

Теория вопроса. Состав, рН и объем слюны непостоянен, ежедневно образуется до двух литров смешанных секретов гипотонического характера. Концентрация натрия составляет около 20-40 мэкв/л, хлор - варьирует в таких же пределах, калий - в 4-5 раз выше, чем в плазме крови. Концентрация кальция в слюне - 6-20 мг/100 мл. Бикарбонаты составляют 10-20 мэкв/л. Основными органическими компонентами являются: муцин, небольшое количество глюкозы, мочевины, мочевой кислоты, лактата, фенолов, витаминов. Значительные вариации, обнаруженные в химическом составе слюны, связаны с различными методами сбора, стимуляции и другими факторами. Так, при гипофункции щитовидной железы снижается скорость секреции слюны, увеличивается её вязкость, что способствует развитию кариеса. Кислотность слюны зависит от скорости слюноотделения, буферной ёмкости слюны, гигиенического состояния полости рта, характера пищи, времени суток, возраста. При низкой скорости секреции слюны и несоблюдении гигиены полости рта рН слюны смещается в кислую сторону, что приводит к быстрому развитию кариеса. С возрастом отмечается тенденция к снижению кислотности и повышению уровня кариесрезистентности. У беременных рН слюны смещается в кислую сторону. Такая же направленность изменения кислотности слюны выявлена у больных после лучевой терапии. Изменения водородного показателя слюны сказываются на насыщенности её гидроксиапатитами. Со снижением рН слюны степень перенасыщенности её гидроксиапатитами снижается, но в пределах значений рН 6,0-8,0 слюна остается перенасыщенной гидроксиапатитами. При рН ниже 6,0 слюна становится ненасыщенной гидроксиапатитами, и теряет свои минерализующие свойства. Таким образом, величина водородного показателя 6,0-6,2 является критической, т.е. слюна при этом переходит в ненасыщенное состояние, приобретая свойства деминерализующей жидкости. У лиц с низким значением рН слюны и наличием зубного камня выявляется высокое содержание кальция и фосфора в слюне. При подщелачивании слюны повышаются её минерализующие свойства, увеличивается степень перенасыщенности гидроксиапатитами и образуются зубные камни. Таким образом, рН слюны является одним из важнейших показателей её гомеостаза, определяющим в значительной мере состояние зубов.





Выделительную функцию слюнных желез оценивают в норме, а также при повышенной и пониженной саливации.

Регуляция секреции слюны

Не существуют спонтанной секреции слюны слюнными железами. Секреция регулируется симпатической и парасимпатической иннервацией, гормонами и нейропептидами. Симпатическая иннервация побуждает секрецию белков, а парасимпатическая – повышает выход жидкой фазы секрета. Помимо катехоламинов, ацетилхолина в регуляции тонуса сосудов слюнной жидкости важную роль играют нейропептиды: субстанция Р, которая освобождается из чувствительных афферентных нервов и является медиатором повышения проницаемости для белков плазмы крови; вазоактивный кишечный полипептид (VTP), участвующий в нехолинэргическом расширении сосудов и вызывающий повышение секреции белков.

С целью прогнозирования кариеса был предложен показатель, характеризующий скорость секреции слюны. Она носит фазовый характер. Скорость секреции повышается с первых лет жизни до 11-12 лет, снижается в 21-40 лет и уменьшается в 60 лет.

Ход работы: Скорость секреции слюны может изучаться натощак или после пробного завтрака. Для этого в течение 15 минут собирают слюну в мерную пробирку. Скорость секреции считают уменьшенной, если слюны выделяется до 30 мл/час (0,5 мл/мин) натощак и 50 мл/час (0,8 мл/мин) - после пробного завтрака. Для стимуляции слюноотделения используют 1% раствор пилокарпина гидрохлорида (8 капель внутрь), лимонную кислоту (кристаллик под язык), 1 см2 парафина (путем жевания). Определяем рН слюны натощак и после пробного завтрака.



Качественная реакция по определению роданидов в слюне.

Теория вопроса. Роданиды или тиоционаты. Органические тиоционаты - это эфиры тиоциановой кислоты, которые могут взаимодействовать с органическими тиосульфатами.

Роданиды присутствуют в слюне и других биологических жидкостях в небольшом количестве в свободном виде. Функция их недостаточно выяснена. Считают, что роданиды могут выступать в качестве коферментов.

Роданиды слюны обнаруживаются по появлению красного окрашивания при добавлении к слюне трехвалентного хлорида железа. Окрашивание вызвано образованием комплексного соединения, содержащего железо и роданид. Эта реакция очень чувствительна, однако некоторые органические соединения, например, фосфор, соли лимонной и уксусной кислот, препятствуют возникновению окраски.

В местах повреждения слизистой оболочки полости рта происходит эмиграция гранулоцитов, которые принимают участие в защитных реакциях. В гранулоцитах локализован фермент лактопероксидаза, который окисляет имеющийся в слюне роданид с помощью перекиси водорода бактериального происхождения в гипотиоционат. Гипотиоционат чрезвычайно бактерициден и совместно с перекисью водорода действует антикариесогенно. Поскольку содержание роданидов в слюне превышает их содержание в других биологических, жидкостях ряд исследователей считают, что слюна концентрирует роданиды. Этот факт используется в судебной медицине: микроскопическая реакция на роданиды позволяет идентифицировать слюнные пятна большой давности. Содержание роданидов велико у курильщиков, что связано с поступлением в их организм синильной кислоты табачного дыма.

Ход работы: В пробирку вносят 5 капель слюны, 2 капли соляной кислоты 2% и 2 капли 0,01% раствора хлорного железа. Возникает красное окрашивание, интенсивность которого варьирует в зависимости от содержания в слюне роданидов и от концентрации соединений, угнетающих образование цветного комплекса.

Качественная реакция на амилазу слюны

Теория вопроса:

Среди ферментов слюны преобладает α-амилаза (КФ 3.2.1.1.). она составляет более 15% от всех ферментов слюны. Слюнная амилаза близка по строению к панкреатической, но кодируется другим геномом. α-амилаза состоит из одной полипептидной цепи, активизируется ионами хлора и стабилизируется кальцием. Оптимум действия амилазы слюны при рН 6,8 - 7.0. Фермент α-амилаза относится к эндоамилазам. действует на 1,4 – гликозидные связи крахмала.

Определение активности амилазы в крови и моче имеет диагностическое значение в первую очередь при остром панкреатите или закупорке выводящего протока поджелудочной железы, что приводит к повышению активности фермента амилазы в крови.

Метод определения активности амилазы слюны основан на способности фермента гидролизовать крахмал до мальтозы и глюкозы.

Ход работы:

В пробирку с воронкой собирают слюну. В одну пробирку добавляют 1 0 капель слюны, во вторую - столько же капель воды. Обе пробирки помещают в водяную баню при температуре 37 0С на 10 минут. Затем добавляют в обе пробирки по 10 капель 0,1% раствора крахмала. Через 5 минут добавляют в обе пробирки по 5 капель реактива Люголя. В первой пробирке жидкость окрашивается в желтый цвет, во второй пробирке, где слюна отсутствует – содержимое пробирки окрашивается в синий цвет.

Обнаружение кофермента НАД в слюне и дрожжах.

Теория вопроса. Многие ферменты для проведения каталитической активности нуждаются в присутствии определенных веществ непептидной природы - кофакторов. В качестве кофакторов выступают ионы металлов, производные витаминов В1, В2, В6, РР и нуклеотиды.

Фермент, содержащий кофермент, называют холоферментом, а белковую часть такого фермента - апоферментом. Взаимодействие кофермента с апоферментом отличается высокой специфичностью.

В реакциях, катализируемых НАД-зависимыми дегидрогеназами, в качестве кофермента участвует никотинамидадениндинуклеотид (НАД).

НАД встречается во многих органах и тканях человека и животных, много его в дрожжах и меньше в слюне. Окисленные и восстановленные формы НАД обладают разными спектрами поглощения в УФ области, что и используют для качественного и количественного определения НАД. Этот кофермент легко извлекается из дрожжей горячей водой (он термостабилен) и может быть обнаружен по образованию флюоресцирующего комплекса с ацетоном. Значительно меньше его содержание в слюне.

Ход работы:

1. К 1 мл слюны добавляют 5 капель ацетона и 2 капли 30% NaOH. Через 5 минут добавляют 1 каплю фенолфталеина и по каплям добавляют концентрированную соляную кислоту до обесцвечивания фенолфталеина. Пробирку встряхивают и на 2 минуты помещают в кипящую водяную баню, затем охлаждают и наблюдают слабую синюю флюоресценцию.

2. В пробирку помещают кусочек дрожжей величиной 4-5 г, добавляют 1/3 пробирки воды и кипятят 20-30 сек, не допуская выбрасывания жидкости, отфильтровывают в пустую пробирку 5-10 капель полученного экстракта, добавляют туда 3-5 капель ацетона и 1-2 капли 30% раствора гидроксида натрия. Оставляют пробирку стоять 2 минуты, затем добавляют 1 каплю раствора фенолфталеина и по каплям добавляют концентрированную соляную кислоту до обесцвечивания фенолфталеина. Пробирку в процессе добавления кислоты встряхивают. Помещают пробирку на 2 минуты в кипящую водяную баню, после чего вынимают, охлаждают и наблюдают синюю флюоресценцию.

 








Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту:



©2015 - 2024 stydopedia.ru Все материалы защищены законодательством РФ.