Сделай Сам Свою Работу на 5

Применение указанной таблицы для интерпретации полученных





ИНСТРУКЦИЯ

ПО ПРИМЕНЕНИЮ ДИСКОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИБИОТИКАМ

Диски с антибиотиками предназначены для определения чувствительности к антибиотикам возбудителей заболеваний, выделенных из патологического материала больных.

На основе данных о чувствительности выделенного микроорганизма к различным антибиотикам осуществляется выбор оптимального препарата для лечения больного, а также подбор эффективной схемы антибиотикотерадии.

В связи с тем, что определяемая ин витро степень чувствительности микроорганизмов зависит от условий постановки опыта, для получения достоверных и воспроизводимых результатов необходимо точное выполнение требований настоящей инструкции, а также использование дисков промышленного производства и стандартных питательных сред.' –

МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ

1.Питательные среды.

Для определения чувствительности рекомендуют использовать одну из

следующих плотных питательных сред:

а) Среда № 1:

Бульон Хоггингера с содержанием 120-140 мг% аминного

азота .................................................................................. 1000мл



Агар-агар ……………………………………………… 15 г

Натрия фосфат двузамещенный ……………………...... Зг

рН после стерилизации ....................…………………….7,2-7,4

б) Среда №2:

Мясо-пептонный бульон 1:2.......................................….. 1000мл

Агар-агар..............................................……………………15г

Натрия фосфат двузамещенный ………………………... Зг

рН после стерилизации ...................……………………... 7,2-7,4

 

в) Среда №3 - это сухая питательная среда АГВ; в состав которой сухой питательный рыбный бульон, агар-агар порошковидный ("Тафуинский"), крахмал растворимый, натрий фосфат двузамещенный. Среду готовят из сухого порошка в соответствии с указанием, имеющимся на этикетке: рН после стерилизации 7.4 + - 0.2,

 

2.Приготовление чашек

Расплавленную среду разливают по 20 мл в стерильные чашки Петри диаметром 100 мм. расположенные на горизонтальной поверхности. Перед заражением поверхность застывшей среды подсушивают в течение 30-40 минут при комнатной температуре с приоткрытыми крышками. Готовые чашки можно хранить ? и 10*С не более 7 дней; перед употреблением их необходимо подсушить, как указано выше.



 

3 Приготовление инокулята и нанесение его на поверхность агаровой среды.

Инокулят готовят из чистой 18-20-часовой культуры бактерий, выросшей на поверхности плотной питательной среды. Для этого 5-10 изолированных колоний суспендируют в жидкой питательной среде или в изотоническом растворе хлорида натрия. В качестве инокулята можно использовать также чистую 18-20-часовую бульонную культуру. Суспензию или бульонную культуру разводят изотоническим раствором хлорида натрия до мутности оптического стандарта ГИСК им. Л.А. Тарасевича на 10 ЕД (при работе со средой № 1 или 2) или 5 ЕД (при работе со средой АГВ); затем полученную взвесь разводят повторно еще в 10 раз изотоническим раствором хлорида натрия.

Инокулят в объеме 1-2 мл сразу после изготовления наносят на поверхность агаровой среды и равномерно распределяют путем покачивания чашки. Избыток жидкости удаляют пипеткой. Приоткрытые чашки подсушивают при комнатной температуре в течение 10-15 минут.

В экстренных случаях для получения ориентировочных данных о чувствительности микроорганизмов допускается использование для посева непосредственно испытуемого материала. Плотные субстраты (мокрота, кал, гнои и др.) должны быть предварительно тщательно гомогенизированы (растерты). Мочу или экссудат предварительно центрифугируют и посев производят из осадка. Материал наносят на поверхность среды с помощью ватного тампона или петли. После выделения чистой культуры анализ следует повторить.

4. Наложение дисков.

Диски с помощью пинцета накладывают на поверхность, зараженной питательной среды на одинаковом расстоянии один от другого и примерно на расстоянии 2 см от края чашки. На одну чашку следует помещать не более 6 дисков.



 

ИНКУБАЦИЯ ЧАШЕК

Чашки ставят в термостат сразу после наложения дисков и инкубируют в течение 18-20 часов при 35-37 с перевернутыми кверху дном. При определении

чувствительности к метициллину и оксациллину чашки инкубируют при 35 •С

 

6. Учет результатов.

Чашки помещают кверху дном на темную матовую поверхность, так чтобы, свет настольной лампы падал на них под углом 45 градусов (учет в отраженном свете). Допускается учет результата в проходящей свете, однако в этом случае отмечается большая субъективность в оценке диаметров зон задержки роста,

С помощью линейки или измерителя (кронциркуль, штангенциркуль) измеряют диаметры зон задержки роста вокруг дисков, включая диаметр самих дисков с точностью до 1 мм. Не следует обращать внимание на очень мелкие колонии, выявляемые при определенных условиях освещения в пределах зоны торможения роста. При нерезко очерченных краях зон или зонах с двойными контурами следует измерять диаметр зоны по наиболее четкому контуру, игнорируя мелкие колонии или едва заметный газон у края зоны. При наличии больших колоний по периферии зоны граница ее определяется местоположением внутреннего края этой группы колонии. Если крупные колонии распределены по всей зоне, культуру следует проверять на однородность и испытание повторить. Такие колонии при отсутствии загрязнения инокулята посторонней микрофлоры позволяют предположить наличие гетерорезистентной популяции.

При определении чувствительности к некоторым антибиотикам роящихся штаммов протея зона задержки роста может быть затянута тонкой вуалеобразной пленкой, которая обычно не мешает установлению границы зоны.

Интерпретация полученных результатов

Оценку результатов проводят по таблице 1, которая содержит пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, а также значения МПК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.

Пограничные значения диаметров зон представлены раздельно для сред № 1, 2 и АГВ, поскольку эти среды отличаются по ряду параметров, определяющих интенсивность роста микроорганизмов и способность антибиотиков диффундировать в агар.

Полученный значения диаметров зон задержки роста сравнивают с пограничными значениями в таблице 1 и относят изучаемые штаммы к одной из трех категорий чувствительности.

К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата обнаруживаемых в сыворотке крови

больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата. Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.

Метод диффузии в агар не дает надежных данных при определении чувствительности к плохо диффундирующим полипептидным антибиотикам -полимиксину, ристомицину. Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения генерализованной инфекции, определение чувствительности следует проводить методом серийных разведении.

8. Контроль воспроизводимости и точности полученных результатов.

Применение указанной таблицы для интерпретации полученных

результатов определения чувствительности возможно только при соблюдении строгих стандартных условий постановки опыта и использовании стандартных питательных сред.

Для контроля воспроизводимости и точности процедуры определения чувствительности необходимо при каждой постановке теста параллельно с испытуемыми штаммами использовать эталонные штаммы Escherichia coli (АТСС 25922), Staphylococcus aureus (АТСС 25925) и Pseudomonas aeruginosa (АТСС 27853), которые можно получить в ГИСК им. Л. А. Тарасовича.

Эталонные штаммы сохраняют в полужидком питательном агаре под вазелиновым маслом. Пересев производят один раз в 3 месяца.

Диаметры зон задержки роста эталонных штаммов должны соответствовать указанным в табл. 2. Эталонные штаммы могут быть использованы для проверки качества среды, дисков и правильности методам постановки теста.

 

Выше было отмечено влияние катионов Са++ и Мg++ в питательной среде на результаты определения чувствительности. Колебания в содержании указанных катионов особенно сильно отражаются на чувствительности Pseudomonas аеruginosa к гентамицину. что в ряде случаев может привести к неправильном оценке результатов определения. Во избежание ошибок эталонный штамм Pseudomonas аеruginosa АТСС 27853 следует использовать для корректировки пограничных значений диаметров зов при определении чувствительности клинических штаммов Pseudomonas аеruginosa к гентамицину.

Для этого от диаметра зоны эталонного штамма, установленного в опыте, отнимают 6 и 3 мм. Полученные две цифры характеризуют границы "подвижной" промежуточной зоны, т.е. зоны умеренно устойчивых штаммов.

Например, если диаметр зоны эталонного штамма вокруг диска с гентамицином

равен 19 мм, то границами промежуточной зоны будут 13-16 мм, а пограничными значениями для устойчивых и чувствительных штаммов станут соответственно 12 и 17 мм.

Форма выпуска

Диски с антибиотиками выпускают во флаконах по 100 +- 5 штук В связи с гигроскопичностью антибиотиков во флаконы с дисками помещают силикагель-индикатор - вещество от синего до светло-голубого цвета, быстро поглощающее влагу. При увлажнении силикагель-индикатор изменяет окраску на сиреневую или розовую в соответствии с табл. 2 (ГОСТ 8984-75). Диски из флаконов с увлажненным силикагелем в работе использоваться не должны.

Силикагель-индикатор отделяют от дисков прослойкой из гигроскопической ваты.

Условия хранения

Диски картонные с антибиотиками следует хранить а сухом темном месте при температуре не выше 10 С.

Сроки хранения дисков указаны на этикетке упаковки. Диски с просроченным сроком годности использоваться не должны.

После вскрытия флакон с дисками можно хранить в течение недели при температуре рефрижератора (0 *С).

Перед употреблением флаконы с дисками необходимо выдержать, при комнатной температуре в течение одного часа для предотвращения образования конденсата на внутренней стенке флакона.


 

 








Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту:



©2015 - 2024 stydopedia.ru Все материалы защищены законодательством РФ.