Сделай Сам Свою Работу на 5

ПРЕИМУЩЕСТВА, НЕДОСТАТКИ И ОСОБЕННОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ЖИВЫХ И ИНАКТИВИРОВАННЫХ ПРОТИВОВИРУСНЫХ ВАКЦИН





ТИПЫ ВАКЦИН

Единой, общепринятой, классификации вакцин нет. Ос­новными критериями для классификации противовирусных вакцин могут быть: особенности биологических свойств, ко­личество видов (типов) и жизнеспособностей (способностей к репродукции) штаммов, включенных в состав вакцин, а так­же технология их изготовления.

В зависимости от биологической системы, используемой


для культивирования вакцинного штамма, различают ткане­вые, лапинизированные, авианизированные и культуральные вакцины.

2.1.1. Тканевые вакцины в своей основе содержат какую-
либо ткань сельскохозяйственных животных, в которой «раз­
множился» и накопился вакцинный штамм. Например, анти-
рабическую вакцину для ветеринарных целен готовят из
мозговой ткани овец, зараженных пастеровским «фиксиро­
ванным» штаммом вируса бешенства.

Количество таких- вакцин постепенно сокращается. В настоящее время их 5 (против бешенства и против оспы овец, коз и свиней).

2.1.2. Лапинизированные вакцины являются разновидно­
стью тканевых, их готовят из тканей крольчат, зараженных'
адаптированным к ним вакцинным штаммом. В настоящее
время выпускается 7 таких вакцин, главным образом против
ящура и классической чумы свиней,



2.1.3. Авианизированные (эмбрион вакцины) готвят из
экстраэмбриональных жидкостей и тканей развивающихся
эмбрионов птиц, зараженных вакцинным штаммом. Наибо­
лее часто для этих целей используют эмбрионы кур, реже
уток и японских перепелок. У нас в стране выпускают 13
эмбрионвакцин против классической чумы (гриппа) птиц,
болезни Ньюкасла, инфекционного ларинготрахеита, инфек­
ционного бронхита, оспы птиц и вирусного гепатита утят.

2.1.4. Культуральные вакцины готовят из зараженных
переживающих тканей или культур клеток, при этом чаще
применяют роллерный (ротационный) или суспензионный
(реакторный) метод культивирования тканей и клеток. В
последние годы количество таких вакцин возрастает, у нас
в стране для ветеринарных целей выпускают 30 культураль-
ных вакцин (против ящура, бешенства, болезни Ауески, бо­
лезни Тешена, чумы кр. р. скота, классической чумы свиней,
чумы плотоядных, вирусного энтерита норок, инфекционного
ринотрахеита и парагриппа-3 кр. р. скота, трансмиссивного
гастроэнтерита свиней, контагиозного пустуллезного стома­
тита (дерматита) овец и коз, миксоматоза кроликов, болезни
Ньюкасла, болезни Марека и вирусного гепатита утят).



В зависимости от видовой принадлежности вакцинного штамма различают гомологические и гетерологические проти­вовирусные вакцины.

2.1.5. Гомологические вакцины готовят из того вида ви­
руса, против которого предполагается создать иммунитет.


i


Например, вакцины против бешенства готовят из ослаблен­ных, атТенуированных штаммов вируса бешенства. Абсолют­ное большинство выпускаемых вакцин — гомологические.

2.1.6. Гетерологические вакцины готовят из вирусов дру­
гого вида, но имеющих в своем составе аналогичные анти­
гены и обладающие перекрестной иммуногенностью (явле­
ние параиммунитета). Например, вакцина против болезни
Марека готовится из вируса герпеса индеек, но он защищает
кур от болезни Марека.

В зависимости от количества типов или видов возбуди­телей, включенных в состав вакцины, различают монова­лентные, поливалентные, ассоциированные и смешанные вак­цины.

2.1.7. Моновалентные вакцины содержат антигены одного

типа (вида) вируса.

2.1.8. Поливалентные (бивалентные, трехвалентные) вак­
цины готовят из нескольких серологических, типов одного
вида вируса. Например, трехвалентная противоящурная фор-
молзакцина из культурального вируса ящура А-О-С пред­
ставляет собой смесь трех моновалентных вакцин.

2.1.9. Ассоциированные вакцины содержат антигены раз­
ных видов возбудителей. Например, вакцина «Бивак» против
инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 кр. р скота,
«Тетравак» против чумы, аденовироза, инфекционного гепа-



•тита и парвовирусного энтерита собак.

2.1.10. Смешанные вакцины являются разновидностью
ассоциированных, представляют из себя смесь вирусных и
бактерийных антигенов, например, вакцина против чумы пло­
тоядных," ботулизма и вирусного энтерита норок.

Б зависимости от жизнеспособности (способности к ре­продукции) вируса, входящего в состав вакцины, все проти­вовирусные вакцины подразделяются на живые и инакти-вированные (убитые).

2.1.11. Живые вакцины готовят из селекционированных
авирулентных или слабовирулентных естественных (выделен­
ных из природы) или из аттенуированных (искусствено ос­
лабленных) штаммов вирусов. Их называют еще «вирусвак-
цинами». В настоящее время в ветеринарной практике при­
меняется 37 живых противовирусных вакцин.

2.1.12. Инактивированные (убитые) вакцины получают
путем размножения производственного эпизоотического штам­
ма (неослабленного возбудителя) с последующей инактива-


цией (обезвреживанием) его с помощью физических или хи­мических факторов.

Понятие «убитые» вакцины, перенесенное из классической микробиологии, применительно к противовирусным вакцинам в какой-то мере условно: в большинстве ннактнвированных. вакцин обнаруживают жизнеспособных вирионов» кроме того, при совместном пребывании в клетке нескольких вирионов с поврежденным геномом в результате генетических и неге­нетических взаимодействий возможна реактивация, т. е. вос­становление жизнеспособности вируса.

В животноводстве,, птицеводстве и звероводстве применя­ется 19 инактивированных вакцин.

В зависимости от физического состояния вакцины могут быть сухими и жидкими.

Наиболее часто живые вакцины выпускают в сухом виде. Все вышеперечисленные разновидности противовирусных вак­цин можно считать «полновирионными», т. к. они содержат живых или убитых вирионов, включая геном (РНК или ДНК), белки и оболочки вируса.

В последние годы в практику начинают внедряться хи­мические противовирусные вакцины.

2.1.13. Химические вакцины можно считать разновидно­стью инактивированных, но они не содержат в своем составе генома вируса, поэтому они безопасны.

Различают две разновидности химических противовирус­ных вакцин: сплитвакцины и субъединичные вакцины.

2.1.13.1. «Сплитвакцины» готовят из продуктов химическо­
го расщепления вирионов, включая в состав вакцины все
антигены, освобожденные от генома и липидов за счет чего
снижается пирогенность вакцины.

2.1.13.2. Субъединичные вакцины содержат в своем со­
ставе только протективный антиген, против которого в орга­
низме вырабатываются вируснейтрализующие антитела.

Субъединичные вакцины получают путем выделения не­обходимого антигена из разрушенных вирионов. При ряде инфекций (болезнь Марека, лейкоз) субъединичные вакцины готовят из вирусспецифических гликопротеидов клеточных мембран.

Высокая стоимость субъединичных вакцин, полученных традиционными методами (культивирование, очистка, кон­центрация вируса, расщепление вирионов и выделение про-тективного антигена) сдерживает их широкое применение, однако в последние годы.осваивается технология двух новых


разновидностей субъединичных вакцин: генноинженерных исинтетических.

2.1.14. Генноинженерные вакциныпредставляют из себя
очищенные вирусные белки, полученные с помощью клониро­
ванных вирусных ДНК, при этом в качестве продуцента
протективного антигена наиболее часто используют микро­
организмов (эшерихии, сенная бацилла' дрожжи), в плаз-
миду которых «встраивают» ген, ответственный за синтез
протективного антигена. Полученный трансформированный
штамм культивируют в реакторах, он интенсивно нараба­
тывает нужный полипептид, который выделяет из бактери­
альной культуры после разрушения микроорганизмов с по­
мощью методов молекулярной биологии (изопикническое и
скоростное зональное центрифугирование в комбинации с
иммуноафииной хроматографией).

Выход протективного антигена довольно высокий. Напри­мер, из трансформированной культуры эшерихии доля про­тективного антигена вируса ящура составляет 17% от общего бактериального белка. Таким путем за рубежом получены вакцины против ящура, вирусного гепатита В, гриппа, бе­шенства, герпеса.

Б 80-е годы появились новые подходы к созданию проти­вовирусных вакцин — вставки геновч кодирующих синтез протективных антигенов, в геном другого аттенуированного вируса. Так, в 1984 г. в США в геном вируса осповакцины "встроили гены, ответственные за синтез поверхностных анти­генов вируса гриппа игепатита, и такой рекомбинаннт защи­тил экспериментально зараженных от оспы, гриппа игепатита.

Аналогичные работы проводятся и внашей стране.

2.1.15. Синтетические вакциныполучают путем искусст­
венного синтеза полипептидов с определенным набором и
последовательностью чередования аминокислот. Такой син­
тетический пептид должен соответствовать главной антиген­
ной детерминанте вируса, выполняющей функции протектив­
ного антигена. Для получения синтетической вакцины его
связывают с Т-независимым носителем — полимерным анти­
геном, который может вызывать В-клеточный иммунный от­
вет и без участия Т-лимфоцитов.

Имеются основания считать, что будущее за генноинженер-ными и синтетическими вакцинами.

Весьма желательно, чтобы тип вакцины был четко отра­жен в ее названии, что помогло бы сразу осмыслить суть препарата. К сожалению, на сегодняшний день отсутствует


общепринятая научно обоснованная классификация вакцин и в названиях вакцин встречается много досадных недора­зумений.

С практической точки зрения ветеринарным специалистам наиболее важно знать особенности изготовления, контроля и применения живых и инактивированных противовирусных вакцин.

2.2. ЖИВЫЕ ВАКЦИНЫ

2.2.1. Требования, предъявляемые к штаммам для изгото­вления живых вакцин.

Для изготовления живых вакцин используют селекциони­рованные естественные, аттенуировайные игетерологические штаммы вирусов.

Естественные(выделенные из природы) апатогенные или слабовирулентные штаммы— это естественные, спонтанные мутанты, утратившие способность вызывать заболевание, но сохранившие иммуногенные свойства, Они, как правило, ин­терферируют с неослабленными, эпизоотическими штаммами. К этой категории относятся, например, вакцинные штаммы В|, Ла-Сота и Бор 74 ВГНКИ вируса болезни Ньюкасла.

Аттенуированные,т. е. ослабленные экспериментатором штаммы.Это индуцированные мутанты. Их обычно получа­ют в лабораториях путем целенаправленного воздействия на эпизоотические штаммы различными, физическими и химиче­скими мутагенами или путем пассажей через необычные (ма­ловосприимчивые) биологические системы. При пассажах на животных успех во многом зависит от, выбора метода за­ражения. Так, например, Луи Пастер, путем серийных ин-трацеребральных пассажей (133) уличного вируса бешен­ства на кроликах получил вакцинный штамм, известный под названием вирус «фикс».

Путем пассажей на кроликах были получены вакцинные штаммы вирусов чумы кр. р. скота и классической чумы сви­ней.

В результате серийных пассажей на мышах получены вак­цинные штаммы вирусов гриппа и ящура.

Путем пассажей на куриных эмбрионах получены вак­цинные штаммы вирусов болезни Ауески, чумы плотоядных, гепатита утят, инфекционного ларинготрахеита кур.

После длительного пассирования вкультуре клеток полу­чены вакцинные штаммы вирусов чумы кр. р. скота, инфек-


ционного ринотрахеита, парагриппа, и вирусной диареи кр. р.
скота, ящура. .

Отбор мутантов ведут на основе знания генетических при­
знаков (маркеров). j

Выделение мутантов облегчается при использовании кло­пов вирусов, полученных из одиночных очагов (оспин, бля­шек) и создания условий, при которых происходит преиму­щественное размножение вирионов с измененной наследст­венностью. Так, например, путем. ,клонирования отбирают термочувствительные мутанты вируса гриппа, которые хоро­шо культивируются, при 28—32°,. но при. 37° их репликация ограничена. При введении в организм они успешно размно­жаются в клетках слизистой оболочки носовой полости, а их репродукция в легких затруднена.

Гетерологические (гетерогенные) штаммы, это штаммы другого вида вируса, но имеющего близкое антигенное род­ство с возбудителем. Так, вирус герпеса индеек защищает, кур от болезни Марека, вирус кори человека в состоянии защи­тить щенков от чумы плотоядных, вирус оспы голубей созда­ет иммунитет против оспы кур, вирус фибромзтоза защищает кроликов от миксоматоза.

В принципе, живые вакцины могут содержать и «дикий» тип- вируса, т. е. неослабленный вирус, но в таком случае его вводят в организм неестественным путем, в результате чего ограничивается репликация вируса в месте введения, вызывается лишь бессимптомная инфекция, заканчивающа­яся выработкой иммунитета. Так, в США для. профилактики аденовирусной инфекции у солдат, используют вирус «дико­го» типа, заключенный в таблетки с покрытием. Когда таб­летка'достигает кишечника, вирус освобождается, но желу­дочно-кишечный тракт не является естественной средой оби­тания аденовируса, он не вызывает заболевание, макрофаги и специализированные антигенпрезентирующие клетки пе­редают информацию Т- и В-лимоцитам, в результате чего обеспечивается иммунный ответ и устойчивость к инфекции.

Любой вакцинный штамм должен быть хорошо изучен, классифицирован, клонирован и паспортизирован. В паспор­те указываются основные генетические признаки, выявляе­мые, постоянно воспроизводимые и контролируемые в процес­се поддержания его жизнеспособности и хранения (остаточ­ная вирулентность, способность репродуцироваться и титры активности в конкретной биологической системе, особенности проявления инфекционного действия,-..спектр гемагглютина-


ции, степень чувствительности к физическим и химическим факторам).

Эти признаки должны быть наследственно закрепленны­ми, вакцинные штаммы не должны подвергаться реверсии (возврату в исходное состояние) в том числе и при пассажах на естественно восприимчивых животных. Они не должны вызывать специфического инфекционного процесса у живот­ных после введения им массивных доз вакцинного штамма (в 5—10 раз превышающих иммунизирующую дозу).

Вакцинные штаммы должны обладать способностью при­живляться в организме" естественно восприимчивых животных. От длительности приживаемости обычно зависит продол­жительность и напряженность иммунитета. Высокоиммуно-генные штаммы приживаются в организме на срок от 2 до 4 недель.

Живые вакцины должны создавать напряженный имму­
нитет не менее чем-у 70% однократно вакцинированных жи­
вотных, этого достаточно для создания условий, препятству­
ющих дальнейшему распространению болезни в неблагопо­
лучном стаде. ■ ■

2.2.2. Принципы изготовления живых вакцин.

Вакцинные штаммы сосредоточиваются, поддерживаются, хранятся и контролируются в ВГНКИ ветеринарных препа­ратов (г. Москва). Вакцины готовят на биофабриках,, био­комбинатах или других предприятиях по производству био­препаратов, которые получают вакцинные штаммы- из

вгнки. ■■-.,.

Технология изготовления живых вакцин сводится к куль­тивированию вакцинного штамма в какой-либо биологиче­ской системе (животные, эмбрионы птиц, культуры тканей и клеток). ■

Для предупреждения размножения бактерий, случайно попавших во время сбора и расфасовки вируссодержащего материала, в состав живых вакцин иногда включают анти­биотики (пенициллин, стрептомицин, гентамицин).

Для профилактики контаминации живых авианизирован-ных вакцин микоплазмами и вирусами применяют предин-кубационную термообработку яиц при 42—45° в течение 4 — 7 часов с последующим переводом их на обычный режим ин­кубации, кроме того, для инактивации вирусов лейкозов готовые вакцины выдерживают при 4° не менее 4 недель.

Наиболее желательно для изготовления живых вакцин использовать чистые биологические системы, эмбрионы и

и


 


эмбриональные культуры клетокяпонских перепелок или кур,, свободных от специфических патогенных факторов (СПФ-жи-вотные).

Выпускаются живые вакцины, как правило, в лиофильно высушенном виде. В процессе высушивания активность ви­русов не должна снижаться более чем на 1,0—1,5 логарифма, что обеспечивается за счет добавок стабилизирующих ве­ществ.

В качестве примера приведем основные данные по изго­товлению сухой лапинизированной авирулентной вирусвак-цины (АСВ) из штамма К против классической чумы свиней.

Для изготовления вакцины на биофабрике используюг кроликов массой 1,8—2,5 кг, которых поставляет специали­зированный зверосовхоз.

Клинически здоровых кроликов заражают внутривенно адаптированным к ним вирусом чумы свиней (2 мл суспензии селезенки ранее инфицированного кролика в физиологиче­ском 0,85%-ном растворе натрия хлорида 1:10).

За зараженными кроликами ведут наблюдение, проводят термометрию. Через 48 час. (иногда позднее — через 3—5 дней) температура повышается до 40 и более градусов, что свидетельствует о накоплении вируса в< органах и крови кро­лика. В таком состоянии кроликов убивают, обескровливают, извлекают селезенку и брыжеечные лимфоузлы. Собранную кровь дефибринируют. Селезенку и лимфоузлы измельчают, гомогенизируют на коллоидных мельницах с разным зазором ножей, добавляя на 1 часть тканей 14 частей дефибриниро-ванной крови, вводят антибиотики, стабилизирующие веще­ства, разливают по ампулам, замораживают путем отнятия влаги с помощью вакуума (лиофильная сушка).

Вакцина проходит контроли, после чего ее этикетируют и выпускают для применения.

При такой технологии из тканей одного кролика получают 425—1000 доз вакцины против чумы свиней.

ИНАКТИВИРОВАННЫЕ ВАКЦИНЫ

Штаммы, предназначенные для изготовления инактиви-
рованных вакцин, представляют собой культуру типичного
представителя данного вида вируса, по биологическим свой­
ствам они идентичны циркулирующим в природе эпизоотиче­
ским штаммам. ' ', .'.

Изготовление инактивиров'анны'х вакцин также ' начина-


ется с культивирования и накопления производственного штамма вируса в чувствительной биологической системе (жи­вотные, .эмбрионы птиц, культура клеток). Затем вирусо-содержащий материал гомогенизируют, центрифугируют, фрагменты клеточных структур, как правило, удаляют. Из обработанного материала вирус концентрируют ультрацен­трифугированием, сорбцией на геле гидрата окиси алюми­ния или осаждением при помощи химических веществ, после чего вирус инактивируют.

Выбор инактиватора проводят с таким расчетом, чтобы
повредить геном (нуклеиновую кислоту), не повреждая ан­
тигенов, входящих в состав капсида. и суперкапыгдной обо­
лочки. . *■

Для инактивации вирусов используют физические факто­ры (температура до 60°, ионизирующие излучения, действие дневного.света в присутствии красящих веществ, ультрафио­летовые лучи, ультразвук) или химические факторы (измене­ние рН, формалин, бетапропиолактон, гидроксиламин, димер-этиленимин, азотистая кислота, аскорбиновая кислота, глю-таральдегид, этанол, кристаллвиолет и др.). Наиболее часто применяют формалин, бетапропиолактон, димерэтиленимин.

Для повышения иммуногенной активности в состав ин-активированной вакцины вводят стимуляторы иммуногене­за — адъюванты (гидроокись алюминия, аэросил, сапонин, минеральные масла и реже другие препараты).

На заключительном этапе с целью ликвидации возможной контаминации в вакцину вводят консервант (фенол, глицерин, мертиолат,. антибиотики), после чего фасуют и подвергают контролю. : ■ ■ ..

Для примера приведем основные данные по изготовлению противоящурной концентрированной гидроокисьалюминие-вой (ГОД) формолвакцины по методу Френкеля.

Вакцину готовят путем размножения иммуногенных эпи­зоотических штаммов вируса ящура с установленной типовой и вариантной принадлежностью в переживающих эпителиаль­ных тканях языка кр. р. скота.

На мясокомбинатах от только что убитых клинически здо­
ровых животных берут языки, их тщательно промывают, де­
зинфицируют этиловым спиртом и ультрафиолетовыми лу­
чами, затем на специальных приспособлениях с них снимают
эпителий, в виде, стружки. С одного языка получают до 20,0 г
ткани. . . . - .

Эпителиальную ткань помещают в 5-литровые бутыли,


заливают и отмывают солевым раствором Тироде, в свеже-добавленном растворе (на 1 кг ткани 4 л раствора) ткань доставляется на биофабрику (срок хранения эпителия не более 40 час. с момента убоя животных).

На биофабрике эпителиальную ткань помещают в специ­альные реакторы (ферментеры) емкостью 200—600 л. В ре­актор вводят питательную среду Френкеля, содержащую 14 аминокислот, витамины, гормоны, соли, пептон и антибио­тики, после чего туда же вносят вируссодержащую суспен­зию с известным инфекционным титром и активностью в РСК (на 1 кг эпителия вносят 6 л среды и 250 мл вируссодержа­щеи суспензии).

Культивирование ведут при умеренном автоматическом перемешивании и непрерывной аэрации в течение 14—16 часов, после чего вируссодержащую культуральную жидкосты перекачивают в другую емкость, а в реактор вводят новую порцию среды и снова культивируют 8—10 часов, после чего культуральную жидкость берут для изготовления вакцины, а эпителиальную ткань утилизируют.

■Культуральную жидкость центрифугируют, сепарируют и вирус двукратно концентрируют сорбцией на гидроокиси"

алюминия.

Составление серии вакцины производят в реакторе, куда * на 60 частей вируссодержащеи суспензии вводят 32 части 6% гидроокиси алюминия, 1 часть гликоколового"буфера, 1 часть 5%. раствора формалина, смесь инактивируют, 36—38 час. при 25°С, после чего добавляют б частей 10% раетвора хинозоля, 0,3—0,5% сапонина (в зависимости от его адъювантных свойств), антивспениватель и антибиотики. Содержимое пере­мешивают и расфасовывают.

В случае изготовления трехвалентной противоящурной" вакцины А-О-С берут три моновалентных вакцины, смеши­вают в равных объемах, расфасовывают.

Вакцина проходит контроли, после чего флаконы этике-тируют и вакцину выпускают для применения.

2.4. КОНТРОЛЬ ПРОТИВОВИРУСНЫХ ВАКЦИН

Контроль вакцин осуществляют государственные кон­тролеры ВГНКИ ветеринарных препаратов (г. Москва),

При большом разнообразии типов противовирусных вак­цин неодинаковы и методы оценки их качества,■однако, тре­бования к основным показателям максимально унифициро­ваны.


Основными показателями хорошего качества вакцин яв­ляются: стерильность (для инактивированных), чистота, т. е. отсутствие контаминирующих агентов (для живых), безвред­ность, допустимая степень реактотенности, иммуногенность, эпизоотическая и эпидемиологическая безопасность (для жи­вых вакцин против болезней, свойственных человеку и жи­вотным).

Для контроля на чистоту живых и стерильность инактиви­рованных вакцин из отобранных флаконов производят посе­вы на питательные среды (МПА, МПБ с глюкозой, бульон и агар Мартена, МППБ под вазелиновым маслом, бульон и агар Сабуро или Чапека), выдерживают их при 36—37° до 15 дней. При отсутствии роста через 5—6 дней делают пере­севы на аналогичные среды, их выдерживают до 10 дней. Роста микробов, не должно быть.

При наличии роста получают чистые культуры, проводят определение вида с обязательным изучением патогенных и токсигенных свойств. При выделении патогенных микро­организмов вакцину бракуют.

Контроль на полноту инактивации вируса осуществляют путем проведения трех слепых пассажей на чувствительной биологической системе, при этом репродукции вируса быть не должно.

Безвредность вакцин определяют на основании данных о выживании, отсутствию клинических признаков переболева-ния и гибели привитых вакциной животных, при этом лабо­раторным животным вводят максимально переносимые дозы, а сельскохозяйственным — в 2—10 раз превышающие реко­мендуемые для практического применения. Привитые живот­ные должны оставаться здоровыми при наблюдении за ними не менее 10 дней.

Реактогенность вакцин определяют по наличию у приви­тых животных температуры,' местной воспалительной реак­ции, вовлечению в процесс регионарных лимфоузлов, реже с помощью лабораторных анализов крови и мочи.

Для выявления неспецифической токсичности, обуслов­ленной наличием в вакцинах стабилизаторов, сорбентов и консервантов, используют химические методы исследования, например, на содержание свободного формальдегида.

Кроме того, вакцины не должны вызывать аллергизации организма и образования опухолей.

Контроль на иммуногенность проводят на восприимчивых лабораторных или сельскохозяйственных животных путем


заражения вакцинированных животных вирулентным штам­мом в дозе от 5 до 200 полулегальных (ЛДбо) или инфици­рующих (ИДйо) доз при одновременном заражении равного количества равноценных невакцинированных животных. Ме­жду вакцинацией и заражением должен быть срок, достаточ­ный для формирования иммунитета, — он зависит от вакци­ны — от двух суток до двух недель.

Вакцину считают иммуногенной при отсутствий клиниче­ских признаков и гибели не менее чем у 80% вакцинирован­ных при заболевании или гибели не менее 80% контрольных животяых. Допускается заболевание 30%' вакцинированных при 100%-ной гибели контрольных животных.

Реже об иммуногенности вакцины судят по титрам спе­цифических антител в сыворотке крови привитых животных, выявляемым с помощью серологических реакций.

Эпизоотическую безопасность вакцин выявляют на есте­ственно восприимчивых животных, вакцинированных jipo-тив данной инфекции в условиях одного или нескольких хозяйств, благополучных по заразным болезням, а эпизоо­тическую эффективность в условиях хозяйств, неблагополуч­ных по той инфекции, против которой предназначена вакцина.

Для примера приведем контроль противоящурной концен-.трированной ГОА формолвакцины. Ее проверяют на безвред­ность, авирулентность, стерильность и иммуногенность (ак­тивность) ■ :

2.4.1. Контроль на безвредностьна лабораторных живот­
ных.

Вакцину вводят подкожно 5 морским свинкам (массой 400—600 г) в дозе 2 мл, 5 белым мышам (массой 25 г) в дозе 0,3 мл и 2 кроликам (массой 1,5—2 кг) в дозе 3 мл. Срок на­блюдения 10 суток. Животные должны остаться живыми, до­пускается появление на месте введения вакцины некротиче­ской язвы (результат действия сапонина).

В случае заболевания или гибели лабораторных живот­ных проводят бактериологические исследования. При обна­ружении патогенной микрофлоры вакцину бракуют.

2.4.2. Контроль на авирулентность, безвредность и ток­
сичность
на крупном рогатом скоте.

Крупный рогатый скот в возрасте не моложе 18 месяцев и массой не менее 250—300 кг, не ниже средней упитанности поставляют из благополучных хозяйств, где в течение 2 лег не было заболевания животных ящуром и скот не прививали против ящура. В период карантина (14 дней) с помощью

1 16


реакции серозащиты или реакции нейтрализации убеждаются в отсутствии у них специфических вируснейтр ализующих антител.

2.4.2.1. Контроль на авирулентность проводят на 3 живот­
ных, которым под слизистую оболочку языка после анестезии
5% раствором новокаина вводят 2,5 мл вакцины в 10 точек.
За животными наблюдают 10 дней, ежедневно измеряют тем­
пературу тела.

Животные должны остаться здоровыми.

При появлении афт'на языке, слизистой оболочке ротовой полости или на конечностях вакцину считают вирулентной,, выясняют причины и принимают меры по инактивации ви­руса или вакцину бракуют.

2.4.2.2. Контроль на безвредность и токсичность проводят
на тех же 3 животных при отсутствии у них афт. Им допол­
нительно вводят подкожно в области средней трети шеи вак­
цину в тройной дозе. На месте введения вакцины появляется
инфильтрат размером 5—15 см, который затем рассасывает­
ся. Температура тела у животных через 12—24 часа может
повыситься до 40—41° и удерживаться 1—3 дня. Эти изме­
нения расцениваются как местная и общая реакция на сапо­
нин.

Через 10 дней после введения вакцины животных убива­ют, проводят осмотр головы, конечностей и рубца. Вакцину считают авирулентной и безвредной при отсутствии измене­ний, характерных для ящура.

Если серия вакцины окажется вирулентной, она подлежит выбраковке. Если вакцина авирулентна и безвредна, ее раз­ливают и отбирают флаконы в начале, середине и конце фасовки для контроля на стерильность и иммуногенность.

2.4.3. Контрольна стерильность.

Из отобранных флаконов делают высевы на МПБ, МПА и МППБ под вазелиновым маслом.

При отсутствии роста в первичных посевах через 10 дней производят пересев на те же питательные среды. Наблю­дение ведут еще 5 дней. При отсутствии роста данную серию вакцины считают стерильной.

При наличии роста проводят микроскопию, ориентиро­вочно определяют характер микрофлоры и производят пере­сев на дифференциальные питательные среды. Выделенную культуру исследуют на вирулентность и токсичность на 2 кроликах, 2 морских свинках и 5 белых мышах.

При выделении патогенной для лабораторных животных

2 17


микрофлоры вакцину бракуют (наличие сапрофитной микро­флоры допускается, но в вакцину вводят антибактериальные препараты).

2;4;4. Контроль на иммуногенность.

С 1968 г. проводят контроль иммуногенности вакцины на лабораторных животных, для чего морских свинок и белых мышей прививают вакциной в цельном виде и в разведениях (на каждую дозу берут по 8 свинок и 20 мышей), а через 11 дней после вакцинации привитых и контрольных живот­ных заражают адаптированным к ним вирусом ящура.

Учет результатов проводят через 3, 5 и 7 суток по нали­чию генерализованного ящурного процесса, на основании чего рассчитывают 50%-ную вакцинирующую дозу. Вакцину счи­тают иммуногенной, если 50%-ная вакцинирующая доза на морских свинках не превышает 0,35 мл, на белых мышах — 0,47 мл.

Если 50%-ная вакцинирующая доза вакцины будет выше указанной, иммуногенность данной серии проверяют на круп­ном рогатом скоте, для чего смесью вакцины из 20 флаконов прививают 6 животных подкожно в дозе 5 мл в области средней трети шеи.

У привитых животных через 12—24 час. может повыситься
температура тела до 40,5° и удерживаться 1—2 суток. На
Месте введения может образоваться отек размером до 10 см,
который рассасывается к 10-му дню. Эти изменения расце^
ниваются, как реакция на сапонин. .

На 15—17 день вакцинированных животных заражают путем введения им автозного вируса ящура, гомологичного вакцинному, в 2 точки' 'слизистой оболочки языка по 1000О ИДао в объеме 0,2 мл. Одновременно для „контроля зара­жают двух невакцинироваиных1 животных.

Наблюдение за животными ведут в течение 10.дней, еже­дневно измеряя температуру. Через 10 дней их убивают, проводят патологоанатом и чески йосмотр головы, конечностей и рубца.

Вакцину считают активной, если она предохраняет от генерализованного ящурного процесса всех животных: у при­витых не должно быть афт на губах, нёбе, деснах, слизистой рубца и вторичных афт на конечностях, допускается только появление афт на месте введения вируса.

Контрольные животные должны заболеть генерализован­ной формой ящура не позднее 96 час. после заражения.

Флаконы с вакциной, прошедшей контроли, перед отправ-


кой на склад обрабатывают вместе с тарой 2%-ным раство­ром едкого натра, в каждый ящик вкладывают наставление по ее применению.

Транспортируют и хранят вакцину при температуре 1—8°.

При нарушении условий хранения, транспортировки, за­мораживании, нарушении целостности флаконов, отсутствии этикеток вакцина к применению не подлежит.

ПРЕИМУЩЕСТВА, НЕДОСТАТКИ И ОСОБЕННОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ЖИВЫХ И ИНАКТИВИРОВАННЫХ ПРОТИВОВИРУСНЫХ ВАКЦИН

Технология изготовления живых вакцин, как правило, проста, они относительно дешевы, выпускаются чаще в сухом виде, поэтому удобны для применения.

Живые вакцины применяют однократно, в минимальных дозах. Их можно вводить подкожно, внутримышечно, интра-назально, а также аэрозольным (аэрогенным) и энтеральным (с кормом или водой) способом. Основное преимущество живых вакцин в том, что они вызывают акт^вадию^гру ком­понентов иммунндХ-ОСхамы,—сцшу-лирутпт nrtmwfi (систем-нШГ) и местный_иммунпый_ответ на_каждый._из _яап_титиык антигенов,.

Они создают продолжительный и напряженный иммунитет за счет приживляемости, размножения и диссеминации в ор­ганизме вакцинного штамма, при этом иммунитет формиру­ется быстро, на первых этапах обычно за счет интерферен­ции, а затем обусловливается накоплением вируснейтрали-зующих антител.

Живые вакцины применяют как для профилактики забо­левания, так и при борьбе с эпизоотиями в неблагополучных и угрожаемых зонах.

Однако, живые вакцины имеют и ряд .недостатков. В зависимости от физиологического состояния животных (не­уд овлетворнтёдьн&ё" условия содержания, нёдбстаточное,не­полноценное кормление, наличие хронических и латентныхинфекций, инвазий, гиподинамия,стрессы и пр.) ждяые. дак-цины_могут вызвать поства_клидльньш__а£шсции (лихо'радка, активация хронических и латентных инфекций, снижение про­дуктивности, избыточная смертность, аборты)и осложнения (аллергические реакции, врожденные уродства, низкая ус­тойчивость к заражению).

При использовании живых вакцин необходимо учитывать уровень остаточной вирулентности вакцинного штамма. Так,.

9*


например, вакцинный штамм Н вируса болезни Ньюкасла патогенен для цыплят до 2-месячного возраста. Вакцина из этого штамма и у взрослых кур, особенно при наличии ави­таминозов и инвазий, может вызывать потерю аппетита, пре­ждевременную линьку, снижение яйценоскости, нарушение координации движений, параличи ног, крыльев, шеи; часть привитой птицы может погибнуть.

После применения вакцины из штамма Н может быть обо­стрение хронически протекающих заболеваний (туберкулез, микоплазмоз, тиф, сальмонеллез, колибактериоз, инфекцион­ный бронхит, спирохетоз, кокцидиоз)- Эту вакцину исполь­зуют в неблагополучных по болезни Ньюкасла птицехозяй-ствах, прививают цыплят с 2-месячного возраста, а в благо­получных и угрожаемых хозяйствах применяют вакцины из штаммов Bj и Ла-Сота, которые не вызывают клинической реакции даже у однодневных цыплят.

Живые вакцины всегда хранят в себе потенциальную опас­ность, связанную с возможной реверсией, т. е. возвратом вак­цинного штамма в исходное состояние. Кроме того, при куль­тивировании вакцинных штаммов в эмбрионах птиц, культуре клеток или в организме животных имеется потенциальная опасность контаминации, т. е. загрязнения вакцины грибами, бактериями, микоплазмами, хламидиями и вирусами, в том числе патогенными и онкогенными агентами, что усложняет .контр.оль и. сдерживает широкое применение живых вакцин.

С целью недопущения инактивации вакцинного штамма хранить и транспортировать живые вакцины необходимо при пониженных температурах (не выше 8°С), а>место введения живой вакцины нельзя ■ обрабатывать дезинфицирующими веществами.

 








Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту:



©2015 - 2024 stydopedia.ru Все материалы защищены законодательством РФ.