|
|
РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ (РА) ИЛИ ПРЯМАЯ РА.12 ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ на тему: «Органы иммунной системы. Иммунокомпетентные клетки. Антитела. Иммунодиагностические реакции»
Методические указания для студентов
Дисциплина иммунология Специальность: 060101 «лечебное дело» (очно-заочная) курс 3 семестр 6
Уфа-2013
Тема:«Органы иммунной системы. Иммунокомпетентные клетки. Антитела. Иммунодиагностические реакции» на основании рабочей программы по учебной дисциплины: « иммунология», утвержденной 2013г.
Автор: проф. Ахтариева А.А.
Рецензенты: проф. Мавзютов А.А. проф. Ефимов Г.Е.
Утверждение на заседании № кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии
«____»__________2013 г
1. Тема: «Органы иммунной системы. Иммунокомпетентные клетки. Антитела. Иммунодиагностические реакции»
Актуальность темы: Пусковым фактором иммунного ответа служит антиген- микроб. Основой является активация лимфоцитов (Т и В). В представлении антигенов Т- лимфоцитом решающую роль играют антиген представляющие клетки (А клетки). На этом этапе индукции иммунного ответа взаимодействие антигена с клетками ИС ведет к формированию иммунологической памяти и эффекторов гуморального и клеточного иммунитета. Фаза реализации предполагает уничтожение антигена антителами (гуморальный иммунитет) или сенсибилизированными Т-лимфоцитами (клеточный иммунитет). Для выявления гуморального иммунитета и идентификации микроба- антигена применяются реакции антиген- антитело (иммунологические реакции).Знание механизмов иммунологических реакций позволяет студентам понять современное понимание сущности механизмов развития заболеваний и ориентироваться в иммунологическом методе диагностики.
2. Учебные цели: Изучение биологических механизмов иммунной защиты организма. Для формирования профессиональных компетенций студент должен знать: -анатомо- физиологические особенности органов иммунной системы; -функции иммунокомпетентных клеток; -правила работы в иммунологической лаборатории; -основные виды биологического материала для иммунологического исследования; .Для формирования профессиональных компетенций студент должен уметь: -дифференцировать иммунокомпетентных клеток; -ориентироваться в способах постановки РА - интерпретировать полученных результатов реакции агглютинации -идентифицировать микроорганизмов по антигенной структуре . 3.Материалы для самоподготовки к освоению данной темы: 1. Иммунная система организма человека. Центральные и периферические органы. 2. Основные клетки иммунной системы: А-клетки, Т- и В- лимфоциты, их субпопуляции. Нулевые клетки. 3. Антитела, классы иммуноглобулинов, структурные и функциональные особенности. Активные центры иммуноглобулинов, их функция. 4. Антигенное строение иммуноглобулинов: изо-, ало-, идиотипические детерминанты. 5. Неполные антитела, аутоантитела. 6. Характеристика реакций антиген- антитело. Механизм, стадии, компоненты. Применение для диагностики инфекционных заболеваний. Диагностические иммунные сыворотки, диагностикумы. 7. Реакция агглютинации, компоненты, механизм, способы постановки, применение. ·
4. Вид занятия: практическое занятие.
5. Продолжительность – 3часа
6. Оснащения: таблицы, телевизор, лабораторная посуда, диагностикумы, культура, диагностические сыворотки.
7. Содержание занятия. 7.1. Контроль исходного уровня знаний и умений. 7.2. Разбор с преподавателем узловых вопросов, необходимых для освоения темы занятия.
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ
Иммунологические реакции (ИР) широко используются в лабораторной диагностике инфекций. Их применяют: 1) для выявления антител в сыворотке крови, т.е. серологической диагностики инфекционного заболевания; 2) для определения вида или серовара микроорганизма, т.е. антигенной идентификации его. ИР выявляют образование комплекса АГ-АТ. При этом неизвестный компонент определяют по известному. ИР отличаются высокой чувствительностью (связывание АТ с АГ при ничтожно малых количествах) и специфичностью (определяется особенностью строения активного центра АТ и детерминант АГ). Они характеризуются стадийностью развития. Первая стадия специфическая, невидимая для глаз, характеризуется соединением детерминантной группы АГ с активным центром АТ. В результате образуется комплекс АГ-АТ, утративший растворимость в изотонических растворах. Вторая стадия – неспецифическая, видимая на глаз, причем характер проявления зависит от состояния АГ, АТ и условия среды, в котором происходит взаимодействие АГ и АТ. При взаимодействии АТ с корпускулярными антигенами (бактерии, животные клетки, др. клетки) наступают видимые невооруженным глазом изменения (например, хлопья агглютината, лизис клеток). Если с АТ соединяются растворимые (мелкодисперсные) АГ, образование комплексов выявляют в результате предварительной адсорбции АГ (АТ) на корпускулярных веществах (эритроцитах, частичках угля и др.) Скорость реакции зависит от: - оптимального соотношения АГ и АТ. - степени специфичности АГ и АТ. - рН среды (7, 24). - концентрации электролитов (0,85% натрия хлорида). В зависимости от состояния АГ, АТ и особенностей среды, в которой взаимодействуют АГ и АТ, различают реакции агглютинации, преципитации, лизиса, комплимента, нейтрализации и др. ИР подразделяются на простые (двухкомпонентные, участвуют только АГ, АТ) и сложные (трехкомпонентные и многокомпонентные, участвуют АГ, АТ и реагирующая система-сессибилизированные эритроциты, культура клеток, кожа восприимчивого животного и др.). В настоящее время широкое применение получили ИР, в которых участвуют меченные АГ и АТ (р. иммунофлуорисценции., радиоиммунный и иммуноферментный методы).
РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ (РА) ИЛИ ПРЯМАЯ РА.
Агглютинация – это склеивание и выпадение в осадок микроорганизмов или других клеток(корпускулярных антигенов) под действием специфических антител в присутствии электролитов. РА применяется для серологической диагностики инфекционных заболеваний (реакция Видаля- при брюшном тифе и паратифах, р. Вейгеля- при эпидемическом сыпном тифе, р. Райта- при бруцеллезе и др.) и для серологической идентификации микробов. В РА участвуют 3 инградиента: 1) корпускулярный АГ (агглютиноген); 2) АТ (аглютинин); 3) Изотопический раствор хлорида натрия (электролит). Антигены – взвесь живых и убитых микроорганизмов. Идентификацию вида (серотипа) микроба, выделенного от больного или внешней среды определяют по известному антителу(диагностической иммунной сыворотки). Положительный результат реакции укажет на то, что неизвестный микроб идентичен тому, который был взят в качестве антигена для приготовления иммунной диагностической сыворотки. Для приготовления взвеси испытуемого микроорганизма, суточную агаровую культуру бактерий смывают 1-2 мл. физиологическим раствором, доводя концентрацию до 2-х млрд. микробных клеток в 1мл. При определении неизвестных антител в сыворотке крови больного или реконвалисцента принято пользоваться заранее заготовленными диагностикумами- микробами, убитыми формалином, спиртом, прогреванием, которые готовятся в производственных условиях. При лабораторной диагностике некоторых инфекционных заболеваний, например, брюшного тифа и паратифов, имеет значение раздельное определение О- и Н- антител в исследуемых сыворотках, т.к. время их появления у больных и сохранение у реконвалисцентов различно. Для этих исследований необходимо располагать соответственно О- и Н- диагностикумами. Для приготовления жгутикового Н-антигена к взвеси агаровой культуры микробов в физиологическом растворе добавляют 0,2% формалина и выдерживают при 37º в течение 24 часов. О- диагностикум получают прогреванием пробирки со смывом агаровой культуры соответствующего микробов кипящей водяной бане в течение 1,5-2 часов. Антитела (сыворотки). А) Испытуемая сыворотка от больного или реконвалисцента получается из крови, взятой стерильно из локтевой вены в количестве 1-2 мл в стерильную пробирку; оставляют на 1 час при комнатной температуре или при 37 градусах на 30 минут. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки бакпетлей, затем пробирку оставляют в холодильнике на ночь. Кровь центрифугируют и отсасывают сыворотку. Готовят последовательно, чаще двухкратные, разведения сыворотки. Обычно разводят в соотношении от 1:50 до 1:800. Количество неизвестных агглютинирующих антител в сыворотке оценивается по титру- наибольшему разведению сыворотки, которое еще дает реакцию агглютинации (выпадение осадка- агглютинина). Б) Агглютинирующая диагностическая иммунная сыворотка готовится в производственных условиях путем иммунизации кроликов(реже лошадей) соответствующими антигенами (взвесью живых или убитых микроорганизмов, эритроцитов и т.д.). Полученную иммунную сыворотку, определив его титр, разливают по ампулам с добавлением консерванта. Иногда употребляют высушенную сыворотку. Изотонический раствор хлорида натрия- 0,85% химически чистой поваренной соли, рН 7,2-7,4. РА должна сопровождаться контролем АГ и контролем АТ (сыворотки) для исключения спонтанной самопроизвольной агглютинации, которая может наступить в 2-х случаях: А) при потери антигеном специфичности (он диссоциирован на S-формы в R). Б) при изменении рН реакции в кислую сторону. Существует два основных метода постановки РА: 1) Ориентировочная РА на предметном стекле, наступающая в течении нескольких минут. Применяется только с целью идентификации вида (серотипа) выделенной из организма больного чистой культуры по его специфичности как АГ к серотипу АТ; 2) Развернутая РА в пробирках, которая учитывается через 2 часа выдерживания при 37 градусах и на следующий день стояния при комнатной температуре применяется с целью идентификации микроба и обнаружения АТ в сыворотке крови. РА входит в группу методов, в которых реакция протекает в две фазы: 1) соединение АГ с АТ (специфическая фаза), 2) выпадение образовавшегося комплекса АГ-АТ (агглютината) в растворе солей (электролите) в осадок (неспецифическая фаза). Антигены поливалентны, а антитела двух – (ИгG) или более (ИгМ) валентны. Соединение их приводит к образованию макроконгломератов, выпадающих в осадок. Причем характер осадка зависит от свойств антигена: жгутиковые бактерии, имеющие Н-АГ, склеиваются жгутиками, при этом образуются крупнохлопчатый осадок, который наступает в течении двух часов при 37 градусах. У безжгутиковых бактерий, имеющих соматический О-АГ, происходит склеивание непосредственно самих клеток и образование мелкозернистого осадка. Такой осадок образуется медленно, в течении 18-24 часов при комнатной температуре при 37 градусах. Достоинства РА: 1) Простота постановки. 2) Экспрессность. Недостатки: уступает по специфичности и чувствительности.
7.3. Демонстрация преподавателем методики практических приемов по данной теме. 7.4. Самостоятельная работа студентов под контролем преподавателя.
12 Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: ©2015 - 2024 stydopedia.ru Все материалы защищены законодательством РФ.
|