Сделай Сам Свою Работу на 5

Гилберт С. Биология развития: В 3-х т. Т. 3: Пер. с англ. – М.: Мир, 1995. – 352с.





218 ГЛАВА 20

синтеза белков, участвующих в делении; установлено, что около 5% типов мРНК делящихся клеток отсутствует в неделящихся клетках (Williams, Penman, 1975; Lao, Nathans, 1985). Если эти белки, индуцирующие митоз, кодируются онкогенными вирусами, то в клетке они могут содержаться постоянно, пока она инфицирована вирусом. По всей вероятности, подобная ситуация имеет место в случае онкогенов v-myc и v-fos. Протоонкоген c-fos экспрессируется в течение очень короткого периода времени, когда клетка переходит из фазы G0 в фазу G1 клеточного цикла, например в случае переноса фибробластов из бессывороточной среды в среду, содержащую сыворотку (Greenberg, Ziff, 1984; Kruijer et al., 1984). Ген c-fos может быть активирован ФРТ, интерлейкином-3, фактором роста нервов, КСФ-1 в течение пяти минут после связывания их клеточной поверхностью (Gonda, Metcalf, 1984; Kruijer el al., 1985; Conscience et al., 1986). Белок fos обнаружен в ядрах стимулированных клеток и связан с ДНК (Sambucetti, Curran, 1986). На самом деле c-fos димеризуется с другим протоонкогеном – с-jun, образуя человеческий фактор транскрипции АР-1 (Halazonetis et al., 1988; Rauscher et al., 1988). По-видимому, онкоген v-fos вируса остеосаркомы FBJ мыши обеспечивает клетку такой же информацией. Если клетки инфицированы онкогеном v-fos, они больше не нуждаются для своей пролиферации в ростовых факторах.



Продукт онкогена v-myc вируса птичьего миелоцитоматоза связывается с ядерным хроматином (Donner et al., 1982). Клеточные гомологи гена v-myc (существует несколько близкородственных генов, составляющих семейство протоонкогенов) синтезируют после стимуляции разнообразными ростовыми факторами короткоживущую мРНК и белковые продукты (рис. 20.32) (Kelly et al., 1983). Как и в случае протоонкогенов c-fos продукты гена с-тус появляются сразу же, как только клетка переходит из фазы G0 в фазу G1.

Если белок myc инактивирован антителами, то клетки не пролиферируют (Studzinski et al., 1986). Однако продукты гена туc сами по себе еще не служат достаточным основанием для поддержания клеток в состоянии роста или перехода к злокачественности. Наилучшим объектом для оценки онкогенного потенциала вируса или генной последовательности часто служат клетки NIH3T3. Эти мышиные фибробласты легко поддерживаются в культуре в состоянии роста до тех пор, пока они не вступят в контакт с соседями со всех сторон и пока будет хватать ростовых факторов в сыворотке, где они растут. Клетки 3Т3 избегают старения и становятся практически бессмертными. Однако они не злокачественны. Они сохраняют способность к контактному ингибированию, не растут в суспензии и обычно не образуют опухолей после инъекции мышам. Вместе с тем инсерция в эти клетки онкогена туc делает их злокачественными. Если же онкогены туc будут включены в первичные (смертные) фибробласты, то фибробласты трансформироваться не будут. Ленд и др. (Land et al., 1983) показали, что трансформация нормальных фибробластов может происходить в том случае, когда в одни и те же клетки встроены и онкогены ras, и онкогены туc. Очевидно, что в таких случаях злокачественная трансформация зависит от кооперации туc с продуктами другого онкогена или протоонкогена.



 

Рис. 20.32. Индукция онкогенного белка с-myc в клетках плаценты человека. А. Индукция экспрессии с-myc в ядрах культивируемых клеток трофобласта после стимуляции ФРФ во время 0. Б. Экспрессия с-myc в пролиферирующих ворсинках хориона плаценты человека, выявляемая с помощью гибридизации in situ с радиоактивной ДНК сmyc. В центре рисунка располагается зародыш. Область, затемненная радиоактивностью, выявляет местоположение клеток ворсинок цитотрофобласта. (А – из Goustin et al., 1985; Б. из Pfeifer-Ohlsson et al., 1984; фотография с любезного разрешения этих авторов.)

 


 

Гилберт С. Биология развития: В 3-х т. Т. 3: Пер. с англ. – М.: Мир, 1995. – 352с.

РОСТ И ОНКОГЕНЕЗ 219

Как клеточные онкогены вступают на неверный путь



Формирование большей части человеческих опухолей обусловлено все же не вирусами. Существуют другие механизмы, посредством которых протоонкогены приобретают способность трансформировать клетку. Эти механизмы включают мутации, амплификацию генов и перестройку хромосом.

Онкогенез путем мутаций

Еще в начале шестидесятых годов было известно, что мутагены (агенты, вызывающие мутации) в то же время служат канцерогенами (агентами, вызывающими образование злокачественных опухолей). Брюс Эймс (Ames, 1979) показал, что митогенная способность данного вещества прямо пропорциональна его способности вызывать опухоли. Каким-то образом молекулы, повреждающие ДНК (судя по их способности индуцировать мутации у бактерий), приводят к формированию опухолей у мышей.

В 1982 г. Ших и Вейнберг (Shih, Weinberg, 1982) трансфицировали клетки NIH3T3, введя в них ДНК из опухолевых клеток мочевого пузыря человека (рис. 20.33). Некоторые из мышиных фибробластов захватывают человеческую ДНК, в составе которой может оказаться человеческий ген, трансформировавший клетки мочевого пузыря. Клетки N1H3T3, содержащие этот ген, начинали быстро расти и формировать очаги трансформированных клеток, которые затем были изолированы. ДНК этих клеток была выделена, фракционирована и использована для трансфекции другой группы клеток NIH3T3. Снова некоторые из клеток получили человеческий

 

Рис. 20.33. Выделение мутантного гена ras из карциномы мочевого пузыря человека. Человеческая ДНК характеризуется наличием коротких повторяющихся сегментов ДНК – Alu-последовательностей, располагающихся по всему геному, ДНК из клеток карциномы мочевого пузыря человека экстрагировали, разрезали рестрикционными ферментами и вносили в культуру мышиных фибробластов. Мышиные клетки, включившие онкоген, становились злокачественными и образовывали скопления – клеточные островки. ДНК из этих островков также экстрагировали, расщепляли и вносили в другую чашку с мышиными фибробластами. Когда появились островки, ДНК из их клеток вновь разрезали рестрикционными ферментами и включали в фаговые векторы. Фаги размножались в культивируемых клетках E. coli. Когда бактериальные клетки разрушились, ДНК помещали на нитроцеллюлозный фильтр и гибридизовали с радиоактивной Alu-последовательностью ДНК. Клоны, содержащие Alu-последовательность. выявляли с помощью радиоавтография. Эта последовательность указывает на человеческое (а не мышиное) происхождение содержащей ее ДНК. Поскольку при этом велась селекция на злокачественность, можно полагать, что эти клоны сдержат и онкоген, ответственный за злокачественную трансформацию клеток. Затем было произведено секвенирование человеческой ДНК.

 

 








Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту:



©2015 - 2024 stydopedia.ru Все материалы защищены законодательством РФ.