РДП.Реакция диффузной преципитации.

Цель: индикация, идентификация и титрование антигена или антитела.

Сущность: Антиген и антитело диффундируют на встречу друг к другу в агаровом геле, и при специфичности, в месте соединения образуется комплекс антиген-антитело в виде светлой полосы – линии преципитации.

Техника постановки:

-микрометод

В агаровом геле по трафарету вырезают 5 луночек, в центральную лунку вносим вирусный материал или стандартную сыворотку с антителами. Вокруг исследуемого объекта, вирус суспензию(заведомо положительный антиген или вирус), заведомо отрицательный антиген, и физиологический раствор. Помещают стекло в трмостат при 37⁰ в условиях влажной ткани. Учёт через 6-12-24 часа, контролем являются заведомо полож. и заведомо отриц. антигены. Линия преципитации обязательно должна быть м/у сывороткой и положит. антигеном.

Не должна быть между антигеном и физ. раствотом.

-макрометод

Тоже самое, что и микрометод, только в чашке петри.

-капилярный метод

Стеклянный каиляр заполняют агаровым гелем, с одной стороны вливают антиген, с другой антитело. Это реакция требует высокой концентрации компонентов.

Семейство Тоговирусов (вирусная диарея крс).

(Togaviridae), семейство вирусов, состоящее из родов Alphavirus, Flavivirus, Rubivirus и Pestivirus. Вирусы содержат однонитчатую РНК линейной формы, к-рая является инфекционной. Вирионы диаметром 50—70 нм (альфавирусы), 40—50 нм (флявивирусы), 70 нм (рубивирусы), 40 нм (пестивирусы). Для капсида альфавирусов свойствен икосаэдральный тип симметрии. Род флявивирусов включает 57 вирусов, из них ряд вирусов, имеющих значение в вет. и мед. патологии,— энцефалитов клещевого, энцефаломиелита овец, омской геморрагич. лихорадки, лихорадок жёлтой, К роду рубивирусов относятся возбудители краснухи и, возможно, артерита лошадей, к роду пестивирусов — возбудители диареи коров (комплекс), лихорадки свиней (. Классическая чума свиней),

Вирусная диарея крупного рогатого скота Остро протекающая контагиозная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, диареей, ринитом, эрозийноязвенным воспалением слизистых пищеварительного тракта. Заболевание установлено в 1946 г. Ольсороном и сотрудниками в США.
Возбудитель: РНКсодержащий вирус, относится к сем. Togaviridae, роду Pestivirus; имеет сферическую форму (Гиллепси, 1961 г.). Вирус сохраняется годами при — 20°С, в культуральной жидкости не теряет биологическую активность до 1 года, в крови, в лимфатических узлах, селезенке и др. патологическом материале — до 6 мес. При температуре 25°С в течение 1 сут вирус практически не снижает биологическую активность, при 37°С погибает через 5 сут. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, трипсину и дезоксихолату натрия.
Эпизоотология. Течение и симптомы. Восприимчивы: телята в возрасте от 6 мес до 2 лет.
Инкубационный период: 6—9 суток.
Источник инфекции: больные животные и вирусоносители.
Пути передачи: алиментарный, через обслуживающий персонал.
Симптомы: при остром течении температура повышается до 40—42°С, депрессия, потеря аппетита, истечение из носа, эрозии и язвы на слизистой носовой полости, изъязвления кожи на венчике, кал зловонный, жидкой консистенции, с пеной и слизью; гибель на 2—3 сутки. У коров и молодняка старшего возраста — абортивная форма.
Патолого-анатомические изменения. Обнаруживают подкожные студенистые отеки, гиперемию легких, участки уплотнения красного цвета, окруженные зоной эмфиземы. Слизистая трахеи, бронхов и бронхиол гиперемирована и покрыта слизистогнойным экссудатом. Между долями легкого иногда находят фиброзную ткань. Отмечают также отечность, гиперемию или некроз заглоточных, шейных, бронхиальных и средостепенных лимфоузлов.
Диагностика. В лаборатории проводят РП в агаровом геле, РН в культуре тканей, иммунофлюоресценцию, биопробу на телятах. От больных животных в ранней'стадии болезни отбирают кровь, смывы с носовой полости, фекалии, от вынужденно убитых или павших животных направляют часть различных отделов кишечника, носовой перегородки трахеи, легких, селезенки, лимфоузлы; от абортированных плодов берут кусочки паренхиматозных органов, околоплодную жидкость.
Дифференциальная диагностика. При диагностике вирусной диареи необходимо исключить чуму, злокачественную катаральную горячку, ящур, инфекционный ринотрахеит, парагрипп3, аденовирусную, реовирусную, коронавирусную инфекцию крупного рогатого скота, паратуберкулез, некробактериоз (см. выше).
Профилактика и лечение. Лечение: средства специфической терапии не предложены, проводят симптоматическое лечение.
Профилактика: рекомендуется убой больного скота и проведение ограничительных мероприятий.

Сплит-вакцины, методы получения.

Вакцины из расщеплённого вириона (сплит) после обработки эфира содержат осколки разрушенных вирусных частиц (АГ + баластные примеси).При обработке вирионов этиловым эфиром удаляются липиды.

3 метода получения:

1. получаем большое количество вирусов, их выделяют и получают, имунногенные субъединицы – сплит-вакцины (дорогой способ).

2. Химический синтез специфического иммуногена, но для этого над знать структуру и амминокислотный состав Аг. После их синтеза их соединяют белком носителем. Затем эту смесь используют в качестве вакцины.

3. Генная инженерия. Установлена у отдельных вирусов. Мозаичность генов, т.е. гены кодируются определённый белок имеют вставки, которые не имеют отношения к синтезу белка. Чтобы ген-инфекция реализовалась, вставки вырезают специальными ферментами. Генноинженерные вакцины получают с помощью биотехнологий.

Физическая структура вирусов

.Вирусы имеют каждый свою морфологию.Вирусная частица хорошо приспособлена к переносу НК от одной клетки к другой. Различают:

- вирусные частицы, имеющие липидную оболочку,

- вирусные частицы не имеющие наружной оболочки.

Типы структур:

- палочковидные (спиралевидные)

- нитевидные

- кубической (икосаэдрической) формы.

Суб единица вируса – единая, уложенная определенным образом полипептидная цепь. Капсид – белковый чехол, окружающий ДНК.

Репродукция вирусов

Репродукция вируса – это образование многочисленных копий вирусов (вирусных нуклеиновых кислот) и индуцирование биосинтеза вирусных белков с последующей самоорганизацией этих компонентов в зрелые вирусные вирусные частицы. Вирусы покидают клетку путём взрыва, в том случае, если клетка энергетически истощается, и погибает. Иногда вирусы выходят почкованием (обвиваются клеточной оболочкой), при латентных инфекциях вирус может мирно существовать с клеткой некоторое время.

Основные особенности репродукции.

- наличие РНК или ДНК

- многообразие форм и структуры геномов

- почти все вирусные ДНК способны реплицироваться независимо от ДНК клетки, тогда как клеточные РНК могут синтезироваться только на матрице клеточной ДНК.

- Разобщенный во времени и пространстве (дезъюнктивный) биосинтез структурных компонентов вирусов.

- Вирусы не имеют собственных белок-синтезирующих систем, а используют для этих целей системы клетки.

Наличие большого разнообразия механизмов репликации. Под адсорбцией принято понимать первичный контакт вируса с клеткой. Часто этот контакт сначала бывает очень слабым - обратимая адсорбция. Затем прочность контакта возрастает - необратимая адсорбция. Термин «проникновение» ошибочен потому, что он подразумевает активное воздействие на атакуемую клетку определенной части вириона, что не было доказано. Более вероятно, что во многих случаях на самом деле имеет место совсем другой процесс - прикрепление вируса к клетке вследствие физико-химической комплементарности между поверхностью вируса и молекулами рецепторов, находящихся на поверхности клетки, индуцирует в клетке изменения, необходимые для проникновения в нее вируса. Процесс начинается со случайных столкновений множества вирионов с поверхностью клетки. Участок связывания на поверхности вириона, непосредственно взаимодействующий с рецептором клетки, может состоять из индивидуального структурного вирусного белка, а может и представлять собой мозаику из нескольких белков капсида (по-видимому, именно так обстоит дело у пикорнавирусов). Рецептором во всех случаях служит расположенный на поверхности клетки белок или гликопротеид. На поверхности клетки имеются различные рецепторы, каждый из которых специфичен для своего вируса. Специфичность этих рецепторов не абсолютна, что приводит к возможности группировки вирусов по этому свойству в своеобразные «семейства». Следует подчеркнуть, что сам факт адсорбции вируса на клетке еще никоим образом не означает инициации вирусной инфекции. Связи, образующиеся при адсорбции между вирусом и клеткой, могут быть «слабыми»,, а адсорбция «обратимой», т.е. вирион может покидать поверхность клетки. Однако некоторые из адсорбировавшихся на клетке вирионов связываются с ней более прочными «необратимыми» связями. Следующий этап после прочного прикрепления вириона к поверхности чувствительной клетки - это проникновение внутрь клетки всего вириона или его части и начало синтеза вирус-специфического белка или вирусной м РНК. Проникновение вирионов в клетку и активация вирусного генома могут происходить у разных вирусов по-разному. Ясно, что вирусы с оболочкой и «голые» вирусы должны проникать в клетку в результате разных физико-химических процессов. Уже давно предполагали, что в основе проникновения в клетку вирусов с оболочкой, вероятно, лежит процесс, в какой-то мере подобный «плавлению мембраны», или процесс «слияния». Что же касается таких относительно больших белковых структур, как голые вирионы, то для них известен только один механизм проникновения в клетку - это фагоцитоз, и уже давно предполагается, что такие вирусы проникают в клетки в результате варианта фагоцитоза, названного «виропексисом». ДНК большинства ДНК-содержащих вирусов синтезируется в ядре клетки. Напротив, белки всех без исключения вирусов синтезируются в цитоплазме. Заражение клеток вирусами в принципе может привести к двум последствиям. Зараженная клетка может либо погибнуть, образовав при этом большое количество вируса (литический тип взаимодействия вирусов с клетками), либо продолжать жить и делиться, синтезируя небольшие количества вируса. Многие вирусы лизируют клетки очень редко, и обычно в зараженных клетках устанавливается состояние устойчивого равновесия - образуется персистентно инфицированная культура клеток. Установлено, что при успешной литической инфекции в зараженных клетках происходит пять четко отличающихся друг от друга событий, реализуемых функционально активными вирус-специфическими белками. Это следующие события: 1) подавление вирусом ряда клеточных функций; 2) синтез вирусных м РНК; 3) репликация вирусного генома; 4) морфогенез вирионов; 5) освобождение вирионов из клетки

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском по сайту: